|
不知道你做過細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞凍存沒有,我覺得可能會(huì)對(duì)你有所幫助: 凍存過程中標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/ min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。(程控降溫儀) 也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi).但是從-80℃冰箱轉(zhuǎn)出十必須注意要在2分鐘內(nèi)移入液氮罐中. 為什么必須在2分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)移呢?我覺得你可以也遵守這個(gè)做法,2分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)移應(yīng)該是不會(huì)有什么影響的. 因?yàn)楫?dāng)凍存管從-80℃冰箱取出時(shí),它的溫度將以10度/分鐘回升,而當(dāng)2分鐘后達(dá)到-50℃時(shí)仍不能完成轉(zhuǎn)移,那么細(xì)胞將開始衰退. 所以既然連嚴(yán)格的活細(xì)胞凍存尚且在2分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)移就可以,而且我在實(shí)際操作過程中基本一分鐘左右就可以做到.你僅僅是為提取組織的RNA,根本不需要顧及細(xì)胞存活的問題,那么應(yīng)該更沒有問題.只是速度要快就可以了.然后在需要提取RNA從液氮罐中拿出時(shí)記得原則是快速融化，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。這樣你的組織細(xì)胞就可以避免受損,甚至是細(xì)胞破裂后胞內(nèi)RNA酶溢出這種非常不利于提取RNA的情況. |
|
|
