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代志峰 河南大學淮河醫院檢驗科 在生化室日常工作中，審核結果的時候你是否心中有底，能保證結果的準確可靠。眾所周知，一切生化檢測結果準確的前提是室間質控和室內質控在控。但是，在實驗室都在控的情況下，結果就一定是準確無誤的嗎？ 誠然，對于目前市面上常見生化儀，如常見的日立、東芝、羅氏等，在質控在控的情況下，都已經可以保證檢測結果極高的準確度和精密度。但是在特定的情況下，結果或許不是我們想當然的那樣。 筆者最近遇到一個有趣的結果，機器報告CK=—67。結果顯然是有問題的，酶活性不存在負值的情況。筆者隨即查看項目反映曲線，本應是筆直的斜線變成了平平的直線，且達到設定吸光度（Abs=40000）上限。按照筆者經驗，定是標本中CK濃度過高導致的底物耗盡，果斷對標本10倍稀釋，稀釋后檢測結果CK=1550，查看反應曲線，在測光區為一平滑曲線，符合酶促反應曲線，乘以稀釋倍數后該標本結果CK=15500，然后審核并報告臨床危急值。 筆者想到，是否有同仁不知道為何會出現負值，并且假如機器報告結果為正值，會不會有同仁直接審核結果而導致結果錯報。針對此種情況，筆者對此例檢查結果進行分析，并分享避免此種情況發生的處理經驗。 在此之前，我們必須復習一下生化的常用檢測方法。一種為我們最常見的檢測酶的“酶學方法”，另一種為非酶檢測的“終點法”，包括一點終點法和兩點終點法。在此我們只討論酶活性濃度測定方法。其按檢測方法分為比色法、濁度法、分光光度計法、熒光分光光度計法、量積法、電位滴定法和生物傳感器法，其中以分光光度計法最常用；按照反應時間分為定時法、連續監測法和平衡法，最常用的為連續檢測法[1]。 目前臨床實驗室測定酶活性濃度廣泛采用“分光光度計連續監測法”。其中又以“酶耦聯法”應用最普遍。臨床常規酶學分析所用的酶耦聯法中，多以脫氫酶為指示酶，通過監測其反應物NDDH或NADPH于340nm處吸光度的變化速率來檢測樣本中酶的量[1]。 筆者單位生化儀器為日立7180全自動生化儀，所用試劑購自上海高宗科技有限公司，對酶檢測采用連續監測法進行。舉例說明，對肌酸激酶（CK）檢測為在28到34點處連續監測反應中吸光度的變化率，以此計算樣本中被測酶濃度，如圖1。當待測酶濃度過高時，迅速耗盡試劑盒中底物，到達機器連續檢測區時，酶促反應到達平臺期，吸光度無變化，但是實際檢測中可能出現上下浮動，因此可以出現負值或者低值。 圖1 圖2 對每種項目的試劑盒，廠商都會給出相應的線性范圍，比如CK的線性范圍為0-1500U/L。在此，筆者特意咨詢試劑廠商，對于給定的線性范圍是保守估計。一般情況下，超出給定線性范圍2—3倍都是可以保證結果的準確性，筆者也特意對超出線性范圍的標本進行稀釋檢測，確實與未稀釋標本結果符合，因此，線性范圍只是參考，對于超出線性范圍的標本不一定需要稀釋重測，而需要查看反應曲線，只要是線性曲線，即可保證結果的準確性。 但是以上提及的連續監測法都是在保證底物充足的情況下進行的。當標本檢測酶濃度過高時，試劑盒中底物被迅速耗盡，在達到測光點之前即達平臺期，此時測光點開始連續監測，吸光度前后無變化或變化極小，結果可能會出現極低值甚至負值。 圖3 圖4 在此，筆者反思，在臨床實驗室工作中，怎樣保證報告結果的準確性。首先必須保證實驗室室間和室內質控在控。對于待測濃度超出線性范圍的情況，①大型的全自動生化儀都會有報警提示，對于報警的結果，查看反應曲線來進行相應處理②對于超出線性范圍的檢測結果查看其反應曲線③對于基層醫院的小型生化儀，可以利用組合項目的優勢，比如筆者遇到的情況，心肌酶譜全線升高，某一項目偏低，此時可以查看反應曲線，確定是真低值還是假性低值。 當然，這都是要建立在掌握酶促反應原理及檢測方法的前提下，只有深入了解生化儀的檢測過程，才能在實際工作中去偽存真，為臨床醫生報告準確可靠的值，為病人治療提供一份力量。 參考文獻 [1]府偉靈. 臨床生物化學檢驗[M]. 人民衛生出版社, 2012. 說明：本文為中華檢驗醫學網、檢驗醫學微信公眾平臺全網首發，轉載時請注明來源及原創作者姓名和單位。 |
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