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張俊海，崔紹杰，顧建文，解放軍306醫院，神經外科，整理 目前，國內外學者采用循證醫學方法將200 多種腦保護藥物用于治療急性顱腦創傷病人，未能發現任何一種藥物對顱腦損傷病人具有肯定的療效.因此中藥Traditional Chinese medicine對中樞神經系統保護作用的研究越來越受到重視，尋找新型有效藥物是目前研究的熱點.除了顱腦急性創傷外，缺血性腦血管病嚴重影響人類生活質量.而對于缺血引起的腦組織損傷尚無有效治療藥物.現代醫學研究認為腦缺血再灌注損傷是缺血腦組織在恢復血液灌注后，出現的比灌注前更明顯更嚴重的損傷和功能障礙，是大多數缺血性腦血管疾病的主要病理生理過程.研究表明，腦缺血再灌注損傷的中心區以壞死為主，缺血邊緣區以凋亡為主.因此，臨床治療的重點是早期干預、阻止、中斷其凋亡程序，防止向壞死發展，誘導神經細胞分化增殖以修復、重塑受損神經細胞Brain cells.中藥的腦保護Protective effect作用也主要體現在以下幾方面. 1 對神經干細胞增殖分化的作用 神經干細胞是一類特殊細胞，具有多種分化潛能的具有終身自我更新能力的細胞.研究表明，神經干細胞不僅存在于胚胎腦內，還存在于成年腦內.鑒于此，神經干細胞為神經元損傷的修復及再生提供了機會，通過神經干細胞移植，臨床治療退行性病變，缺血缺氧性腦病后遺癥，腦損傷后的修復重建.采用免疫組化方法研究由人參、茯苓、遠志、石菖蒲的標準提取物顆粒組成的定志小丸檢測齒狀回神經干細胞增殖情況.研究表明，該藥不僅能維持齒狀回的神經細胞的正常增殖，還能夠明顯促進其增殖，提高了自我修復的能力.中藥龜板對局灶性腦缺血后的神經干細胞的影響表明，龜板能促使Nestin表達增強，由此可以得出成年哺乳動物腦內的神經干細胞可能參與損傷的神經元的再生及修復.與其促進成年神經干細胞強的增殖作用有關.通過對黃芩、梔子的提取物黃芩苷、梔子苷對體外培養的神經干細胞的研究表明可誘導神經干細胞特異性分化，使其分化成非成熟神經元.蔡光先等通過含有補陽還五湯的含藥血清對體外低糖低氧損傷后的海馬神經干細胞的研究發現，大部分神經球增大，同時部分神經球伴有貼壁，并有突起生長，表明當腦組織損傷微環境改變時，神經干細胞被激活并開始增殖.并且發現補陽還五湯還能維持神經干細胞增殖的高峰時間.從而提出補陽還五湯能提高神經干細胞的分化的結論.通過對銀杏葉提取物的黃酮糖類和烯內酯類的研究，發現后者的銀杏內酯B 可促進神經干細胞向神經元樣細胞分化.并證實與其濃度關系不大.銀杏內酯B 不能促進神經干細胞分化為少突膠質樣細胞，但有能促進其分化化為星形膠質樣細胞的作用.對銀杏內酯B 進行了同樣的研究.用不同濃度的銀杏內酯B 培養神經干細胞3d 和7d.結果發現，能使分化的細胞形態結構更成熟，對星形膠質細胞分化更為明顯，且其百分率與藥物呈劑量依賴關系.對少突膠質細胞的百分率無影響.高唱研究左歸丸在神經干細胞培養及免疫熒光雙標組化染色后發現，陽性細胞百分率明顯高于對照組.表明左歸丸能促進神經干細胞的增殖及分化.王晗等研究中藥益智提取物原兒茶酸能夠促進脂肪干細胞的增殖.經過原兒茶酸處理的細胞與對照組具有明顯的的劑量依賴性和時間依賴性. 實驗發現，人的脂肪干細胞能夠在體外一定條件下分化為神經元樣細胞.在促進人脂肪干細胞增殖的同時，保持間充質干細胞多分化潛能的特性.楊萍等對中藥制劑肌萎靈注射液不同濃度的神經干細胞培養與對照組比較，經流式細胞儀檢測發現，1%的肌萎靈組NF-200 陽性細胞最多，誘導神經干細胞主要向神經元方向分化.劉建軍等研究單味中藥黃芪、紅花、丹參3 種注射液分別對培養的神經干細胞進行研究.黃芪組的神經干細胞貼壁分化快，免疫組化顯示，分化后的細胞主要是NF200 陽性細胞及GFAP 陽性細胞.流式細胞儀檢測發現，NF 陽性細胞比例上升，GFAP 陽性比例下降.由此可知，黃芪有利于神經干細胞向神經元分化.丹參組用不同濃度的丹參注射液，發現神經干細胞有不同程度的死亡，且與丹參濃度正相關.紅花組作用于神經干細胞，發現不同濃度的紅花注射液對神經干細胞的分化作用不明顯.石田寅夫等用人參皂甙Rg1 和黃芪皂甙ASIV 的不同劑量對胚胎神經干細胞培養進行研究，發現二者有明顯的促進神經干細胞增殖作用.高中低劑量均能明顯增加神經球的數量，兩者均以低劑量作用顯著.李紅梅等采用中藥血清藥理方法和體外神經細胞PC12 的培養研究補腎益智方對不同年齡段大鼠腦髓的作用及影響.選用健康的15 月Wistar 大鼠作衰老動物模型，選健康的3 月Wistar 大鼠作青年對照組.結果發現，模型動物在低濃度時促突起生長低，高濃度時突起數目多而細胞生長能力下降.青年組低濃度時促突起生長高，高濃度時突起數目多而細胞生長能力上升.從而得出模型組經藥物作用后，不僅增值率提高而且突起數目也較青年組多，說明了補腎益智方可能促進神經元的生長.秦亞靜等探討中藥紅景天對抑郁大鼠大腦海馬神經細胞增殖分化及神經元數量的影響.首先給大鼠分組建立抑郁癥模型，采用免疫熒光組化雙標記染色檢測海馬神經干細胞增殖及分化，用形態計量學法計數海馬神經元.結果發現，紅景天能使大鼠海馬齒狀回Brdu 陽性細胞數量增加，Brdu 和β-tubulinIII 雙標記細胞數量增加，二者的百分比均增加并達到正常組大鼠水平.該研究推測，紅景天的有效成分之一紅景天苷可能起到促進海馬神經干細胞向神經元分化作用，從而證明紅景天具有神經保護作用. 2 抑制神經細胞凋亡的作用 細胞凋亡又稱程序性細胞死亡，是一種受基因調控的自主性、程序性細胞死亡過程.腦缺血再灌注損傷細胞的主要死亡方式為凋亡.細胞DNA 早期降解為其特征.細胞凋亡需要啟動細胞內特殊基因轉錄及表達.這些基因產物主要有Bcl-2 蛋白、Caspase、IGF、P53 家族等.孫向紅等采用血清藥理學方法，對中藥復方海康靈進行研究.用神經母細胞瘤細胞進行細胞培養，用含藥血清培養H2O2損傷的神經細胞.證明海康靈有明顯抑制神經細胞凋亡的作用.牛英才等采用大鼠海馬立體定向注射技術誘導阿爾茨海默病動物模型，觀察加減地黃引子提取物對模型腦組織的海馬錐體細胞超微結構的影響及對模型動物腦組織Caspase-3 蛋白表達的影響，結果發現，加減地黃飲子組胞質內脂褐素和尼氏體較多，突觸小泡數量大量增多，損傷的錐體細胞有不同程度的恢復.而加減地黃飲子組海馬勻漿的Caspase-3 表達相對值較對照組降低.表明加減地黃引子能明顯抑制Aβ誘導的神經細胞的凋亡，減少了神經元的丟失.徐遠坤等采用大鼠自體第7 頸椎棘突椎間移植法造大鼠脊髓壓迫模型.用中藥健身丹灌胃給藥，TUNEL 法檢測神經細胞凋亡率.實驗表明，灌藥組在第7d、14d 細胞凋亡數顯著減少，細胞凋亡率維持較低水平.肖嵐等研究腦溢安,用體外培養神經干細胞，造缺氧損傷模型，并用原位末端標記方法行細胞凋亡檢測.用免疫共沉淀等技術研究缺氧損傷下神經干細胞內P38 MAPK 活性.從而表明腦溢安具有抑制缺氧狀態神經干細胞的凋亡，提高神經干細胞存活等保護作用.陳小睿等通過線栓法復制大鼠腦缺血再灌注模型，運用免疫組化法研究通脈醒腦滴丸對腦缺血卒中的作用.測定促凋亡基因Bax、Caspase-3、Cytc 表達，結果通脈醒腦滴丸能下調凋亡基因的表達.證實對腦缺血損傷具有保護作用.鐘森等通過復制大鼠缺血再灌注模型，應用免疫組化方法觀察三七總皂苷（PNS）對Bcl-2、Nestin、BDNF、EGF 蛋白的表達.結果表明，三七總皂苷上調Bcl-2 的表達，從而減少腦細胞凋亡.同時增強Nestin、BDNF、FGF 的表達促進神經干細胞增殖而達到抗缺血再灌注作用.薛茜等采用栓線法復制大鼠缺血再灌注模型，運用TUNEL 法及免疫組化法觀察由黃芪、三七等8 味中藥煎制的康腦液1 號對缺血半暗帶凋亡陽性細胞數目及Bcl-2/Bax 比值的變化，結果發現，康腦液1 號能減少半暗帶區神經細胞凋亡數目，上調Bcl-2/Bax 比值，從而促進腦損傷修復.王少綱通過大鼠缺血再灌注模型，采用免疫組化法探討疏血通對腦細胞Caspase-3 蛋白表達的影響，結果表明，疏血通能抑制Caspase-3 蛋白表達，從而具有腦保護作用. 3對腦缺血再灌注的保護作用 腦缺血又稱腦梗死，是一種由于腦血流供應障礙而致的局限性腦缺血壞死、腦軟化.腦缺血再灌注損傷是其重要環節，其發生機制尚未完全闡明.因此圍繞著這方面的研究是目前的熱點.趙紅念等通過線栓法制備大鼠大腦中動脈阻塞的局灶性腦缺血模型，采用三七三醇皂苷術前6d 腹腔注射，并設生理鹽水對照組及假手術組.用免疫組化方法行腦細胞染色及圖像分析，并進行統計學處理.用藥組與對照組比較有顯著性差異，說明三七三醇皂苷能促進Nestin 表達.表明三七三醇皂苷能促進新生血管形成，腦缺血損傷后的神經修復與血管再生同步進行. 崔榮太等采用同樣的方法制作局灶性腦缺血模型，免疫組織化學染色.研究表明，人參皂甙Rg1 能增強腦缺血后Nestin 的表達，促進神經干細胞的增殖.并進一步發現陽性細胞中可能有兩類神經干細胞，一類是能分化為神經元的以取代損傷神經元的細胞，另一類是能減少 缺血區的擴大的反應性膠質細胞，能修復神經元的細胞.從而驗證該藥具有神經保護作用.祝慧鳳等研究中藥地黃的活性成分梓醇對局灶性腦缺血的神經功能的影響，用免疫熒光組織化學染色法和Westemblot 檢測腦缺血區GAP—43 蛋白的表達，并根據神經行為學評分及肌力評定.結果發現，該中藥能促進腦缺血大鼠的神經功能恢復，并能促進癱瘓大鼠肢體肌力恢復.免疫熒光組化檢測比較，梓醇各劑量組的GAP—43 陽性細胞增加最明顯.表明梓醇對大腦缺血后軸突再生有促進作用.祁存芳等用川芎嗪對大鼠腦缺血再灌注損傷模型進行研究，行BrdU 免疫組化染色，結果腦缺血再灌注損傷后海馬齒狀回陽性細胞數目增加，且明顯高于對照組，表明川芎嗪能促進海馬齒狀回神經細胞的增殖，對缺血再灌注損傷具有保護作用.王立新等通過復制腦缺血再灌注損傷模型，研究中藥通心絡對腦缺血后神經巢蛋白的影響及血管內皮因子的影響.分別采用熒光免疫組織化學法、RT—PCR 法研究大鼠大腦缺血區室管膜及室管膜下區及海馬齒狀回的神經巢蛋白的數值變化.應用Nestin 免疫熒光染色方法測缺血區的陽性細胞數目及568 內 蒙 古 民 族 大 學 學 報 2010年陽性細胞熒光強度值.用RT— PCR 法檢測缺血區VEGFmRNA 的含量.研究發現通心絡治療組與模型組比較，通心絡能增加神經干細胞的表達，并且通過促進缺血區腦組織VEGFmRNA的表達，誘導內源性神經干細胞的增殖，從而促進神經的修復.王立新等進一步研究了通心絡對腦缺血再灌注損傷后胰島素樣生長因子-1與神經巢蛋白的表達關系.方法同上，采用RT—PCR法測缺血區腦組織內IGF-1mRNA.與劑量關系無顯著差異，推斷通心絡可能通過促進缺血區IGF-1mRNA的表達，誘導內源性神經干細胞的存活及增殖.陳勇等通過復制大鼠缺血再灌注模型，觀察自由基指標、NO 改變、腦組織損傷程度及微循環超微結構情況.以研究羌菖注射液對脂質過氧化損傷的保護作用.結果發現，治療組的過氧化脂質(LPO)明顯低于模型組，超氧化物歧化酶（SOD）明顯高于模型組，表明羌活、石菖蒲具有清除超氧化物自由基、減輕脂質過氧化損傷，從而保護缺血再灌注腦細胞損傷的作用. 綜上所述，近年來關于中藥對神經細胞保護作用的研究取得了可喜的成績，為中醫藥防治腦病奠定了一定的理論基礎.但目前研究多是處于實驗階段，需要進一步深入到臨床治療中.中藥具有副作用少，易于取材、價格低廉、歷史悠久等特點，是具有開發潛力的治療腦細胞損傷的藥物.因此，多機制、多藥物聯合應用的綜合性研究有待于進一步開展.同時也為提高中藥治療腦損傷的臨床療效提供科學依據. |
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