仿制藥一致性評價“標準化”操作程序

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作者介紹：楊蕾  哈藥集團制藥總廠

一、前期準備階段

1、確定原研產品主成分，了解原研說明書中主要輔料情況。

原研說明書查詢網址如下：

（1）美國：

FDA： http://www.accessdata./scripts/cder/drugsatfda/index.cfm

美國國立醫學圖書館的dailymed數據庫：

http://dailymed.nlm./dailymed/index.cfm

rxlist ：http://www./script/main/hp.asp

Drugs：http://www./

（2）歐洲：

EMEA：由EMEA主頁進入，Find medicine> Human medicines或

http://www.ema./ema/index.jsp?curl=pages/includes/medicines/medicines_landing_page.jsp&mid=

英國上市藥品信息網址為：http://www./emc/

德國上市藥品信息網址為： http://www./

（3）日本：

PMDA：http://www.info.pmda./psearch/html/menu_tenpu_base.html

JPR：http://e-search./~jpr/jpr_db/eindex.html

e-Pharma的網址為：http://www./

如果您已獲得原研產品：說明書中輔料成分說明如下（以Durlaza膠囊說明書為例）

2、檢索原研品規格、劑型情況，核對自產品種劑型、規格是否與原研品一致，進而確定仿制目標。

FDA參比制劑信息查詢數據庫鏈接如下：

http://www.accessdata./scripts/cder/ob/default.cfm

以阿司匹林膠囊為例，其參比制劑情況如下表：

3、檢索國內外關于原研品種的溶出條件，列表對比，為溶出方法開發提供基礎依據。

 各國藥典標準查詢網址：http://www./standard/ 或

http://db./foreign?name=Amoxicillin+Trihydrate&source=%E5%85%A8%E9%83%A8  （注：最新版BP2015\USP39\EP8.8還需與相應網站客服聯系）

 以馬來酸依那普利片為例：

（1）美國FDA溶出方法查詢網址：

http://www.accessdata./scripts/cder/dissolution/dsp_SearchResults.cfm

（2）馬來酸依那普利片FDA推薦采用美國藥典方法，查詢美國藥典35版溶出方法如下：

（3）日本橙皮書方法

http://www./drugInfo.do?method=init&frameStr=3 （CDE網站）

（4）中國藥典2015版溶出度方法

綜合以上信息情況，各溶出度方法對比情況如下表：

4、檢索國內外藥典收載情況，主要關注有關物質檢測方法及已知雜質情況，咨詢各權威色譜柱廠家針對該品種推薦的色譜柱情況，為雜質對比分析做好鋪墊。

各國藥典標準查詢網址：http://www./standard/ 或

http://db./foreign?name=Amoxicillin+Trihydrate&source=%E5%85%A8%E9%83%A8  （注：最新版BP2015\USP39\EP8.8還需與相應網站客服聯系）

以馬來酸依那普利原料及片劑有關物質各國藥典對比情況如下表：

5、檢索及測定API溶解度信息、穩定性信息、pKa情況。

 日本橙皮書：http://www./drugInfo.do?method=init&frameStr=3 （CDE）

pKa查詢網址：http://www./

 以馬來酸依那普利為例：

6、購買少量原研藥、色譜柱、雜質及主成分對照品，購買不同廠家原料藥供應商產品供對比研究。

7、根據上述信息及檢測結果，制定目標質量概況（QTPP）和關鍵質量屬性（CQA）。

8、參比制劑備案

填寫http://www.s.cn/WS01/CL1751/147583.html 附件1中參比制劑備案表，提交國家局一致性評價辦公室備案。

 小結：通過以上前期文獻調研工作的開展，能夠讓我們能夠更多的了解參比制劑的基本概況，同時也為后續工作開展提供基礎依據，做前期鋪墊。

二、初期研究階段

1、篩選國內外藥典較優分析方法作為含量、有關物質、溶出度等項評價方法。

（列表方式同上述前期準備階段一中3、4部分所述制定相應的表格）略。

2、篩選與原研雜質譜一致的原料作為處方研究用原料，建立原料內控標準。

首先需要確定有關物質檢測方法，而后采用相同的檢測條件對不同廠家原料藥進行有關物質檢查，從而篩選出合適的廠家作為制劑處方研究用原料。

針對制劑的CQA制定相應原料藥的內控標準；如果制劑涉及工藝變更，同樣需要進行質量標準中各檢測方法的考察，通過對國內外藥典方法的對比，首選檢測方法最優，控制限度最嚴的檢測方法，而此時如果原料不能夠滿足制劑的限度要求，為重大缺陷項；所以對原料進行嚴格內控十分必要，在變更申報材料中應重點體現。

3、對篩選出的原料進行溶解度、溶液穩定性考察，繪制pH-溶解度曲線；了解原料晶型、粒度情況；根據結果評估API的關鍵屬性風險。

對篩選出的原料藥進行如下考察工作：

（1）溶解度考察：選擇不同pH介質，37℃條件下測定原料的飽和溶解度。

    介質配制方法：http://www.s.cn/WS01/CL1751/147583.html 附件2。

（2）溶液穩定性：在4℃*及 37℃條件下采用有關物質檢測方法分別測定供試品溶液穩定性（選擇不同pH值介質），考察原料藥在不同介質穩定性及是否有明顯降解雜質產生。如存在較明顯降解雜質，溶出曲線檢測方法建議采用液相方法進行檢測。

*4℃：常規自動進樣器控溫溫度。

（3）pH-溶解度曲線：按照上述（1）中考察所得飽和溶解度情況，繪制曲線。

（4）晶型、粒度考察

a.以獲得原研產品為例，考察原料藥與原研產品晶型對比情況，將對比圖列出如下：

   如為小規格制劑，原研晶型情況大多僅能通過原研晶型專利數據獲得，從而進行晶型情況對比。

b.粒度：僅能通過工藝處方的不斷摸索，原研曲線的對比情況，獲得較為合適的粒度數據。

（5）評估API的關鍵屬性風險

4、以少量原研品初步研究溶出評價方法：

    可參考CFDA普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則及USP1092溶出度試驗的開發與驗證開展研究，以下為較為重要的研究內容。

（1）濾膜吸附試驗：通過試驗比較過濾和未過濾的標準和樣品溶液差別， 驗證該濾膜的選擇是否得當。如對標準溶液，比較過濾溶液（棄去適當體積后）和未過濾的溶液結果；樣品溶液，比較過濾樣品（棄去適當體積后）和離心分離結果差異。（期間可能存在濾膜孔徑及材質篩選）

（2）溶出裝置選擇：溶出試驗推薦使用槳法、籃法，此部分建議參照CFDA發布的普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則，進行方法優化，同時參照《藥物溶出儀機械驗證指導原則（征求意見稿）》要求，定期對溶出儀進行設備驗證。

（3）介質選擇：在確定藥物主成分穩定性滿足測定方法要求的前提下，推薦選擇不少于3種pH值的溶出介質進行溶出曲線考察，如選擇pH值1.2、4.5和6.8的溶出介質。對于溶解度受pH值影響大的藥物，可能需在更多種pH值的溶出介質中進行考察。當采用pH7.5以上溶出介質進行試驗時，應提供充分的依據。水可作為溶出介質，但使用時應考察其pH值和表面張力等因素對藥物及輔料的影響。（對于溶解性較差品種，考察是否加入表面活性劑[濃度推薦在0.01％—1.0%(W/V)范圍內依次遞增，特殊品種可適度增加濃度];某些特殊藥品的溶出介質可使用人工胃液和人工腸液。）

（4）介質是否需要脫氣：難溶性藥物對氣泡的干擾最敏感；因此，檢測這些類型的產品時需要脫氣。典型的脫氣方法：加熱介質，過濾或在短時間內抽真空。比較溶出樣品在脫氣和未脫氣的溶出介質中的檢測結果；如無影響，該試驗可以作為介質不需要進行脫氣處理的理由。

（5）轉速選擇：一般槳法選擇50~75轉/分鐘，籃法選擇50~100轉/分鐘。方法建立的過程中，轉速的選擇推薦由低到高。若轉速超出上述規定應提供充分說明。

（6）溶出檢測方法選擇：常用分析方法一般為分光光度法或液相色譜法。

分光光度法較高效液相法更簡便快捷，且溶劑量使用較少，但專屬性差。

高效液相色譜法有較寬測定范圍，減少樣品稀釋步驟，分析靈敏度高，專屬性強的特點。缺點在于：分析時間較長。但對于存在降解雜質干擾定量準確性品種，其較好的專屬性優勢明顯。

5、配合制劑處方初期研究，進行原輔料相容性試驗。

    原輔料相容性試驗為制劑處方開發提供較為重要的篩選依據，同時也能在較短時間內考察原料穩定性及降解途徑，為制劑產品雜質譜分析提供依據。

6、申請一次性進口參比品。

按照《總局辦公廳公開征求研制過程中所需研究用對照藥品一次性進口有關事宜的意見》附件要求，對藥品注冊相關研究和仿制藥質量和療效一致性評價研究中用于對照藥品的化學藥品需進行一次性進口申請。

申請人應當填寫《進口藥品批件申請表》（附件2），同時提交下列資料：

（一）申請人登記證明文件（如營業執照等），《藥品生產許可證》及變更記錄頁。申請人非進口藥品使用者的，提供實際使用者的委托書。

（二）加蓋申請人公章的書面申請報告。報告內容應包括：本申請所符合的情形、申請進口的原因和依據，申請進口的藥品國外上市情況、申請進口藥品的數量及使用方案。若申請用于開展藥學研究、非臨床研究的對照藥品，申請人須承諾所進口藥品不得用于臨床。

申請人非進口藥品使用者的，由使用者出具上述申請報告。

（三）所申請進口藥品國外已獲準上市證明及合法來源證明文件（購貨發票，或藥品生產企業出具的贈送證明等）。進口臨床試驗對照藥品的，還需提供該藥品說明書、質量標準、出廠檢驗報告書。

    相應鏈接地址：http://www./WS01/CL1757/146701.html

小結： 通過購買少量參比制劑，開展初期的方法開發及研究工作，為一次性進口參比品開展一致性評價藥學研究部分（體外溶出行為比較、有關物質水平比較）提供重要的信息資源，為制劑處方工藝調整提供重要數據支持。

三、處方研究階段

1、溶出評價方法的確定。

    采用一次性進口參比制劑，進一步驗證二中4內容方法篩選的可行性，進一步確定最終溶出曲線對比方法。

2、以原研品溶出曲線情況為目標，進行處方工藝調整，分析配合處方研究檢測工作。

3、配合摸索關鍵工藝參數及控制范圍，制定中間體內控標準。

針對制劑關鍵工藝控制點，設置相應控制項目，采用合適的分析方法，適當的控制限度，建立中間體內控標準。

比如：混粉步驟，通常有混粉均勻度的限度要求；制粒工藝，顆粒含量及水分測定對片劑的片重調整和成品標示量的重要性等。

4、處方確定，工藝放大生產，建立成品質量標準，中試樣品全檢。

    通過中試生產工藝驗證，進一步確定處方工藝的可行性；中試產品與參比品的溶出曲線對比，間接對生產工藝參數范圍的確定提供重要依據。

小結：此階段為一致性評價中藥學部分研究內容的精髓部分，通過對參比制劑的體外溶出行為的深入研究，為制劑處方工藝確定指引方向；又通過中試放大生產，使制劑工藝進入產業化生產適應商業化規模提供重要的支持，同時也為BE實驗成功開展做鋪墊。

四、質量研究階段（待續）

參照2015版藥典四部9101藥品質量標準分析方法驗證指導原則，進行制劑質量研究：

1、溶出度質量研究（①專屬性②線性及范圍[線性范圍要涵蓋溶出曲線中濃度最低值及最高值]③準確度[考查溶出曲線中濃度最低值和最高值時回收率情況]④精密度⑤耐用性[溶出條件耐用性、分析方法耐用性]⑥溶液穩定性等）。

2、有關物質質量研究（基本項目同溶出度質量研究，另需進行雜質定量限及檢測限研究）

3、含量質量研究（基本項目同溶出度質量研究）

4、其他項目質量研究，如聚合物、異構體等項目，參考有關物質驗證內容。

可參考的電子刊物鏈接地址如下：

http://www./dzkw.do?method=largePage&id=1462

http://www./dzkw.do?method=largePage&id=1463

http://www./dzkw.do?method=largePage&id=1470

對變更工藝制劑產品進行全面的方法學研究工作。此部分內容今后進一步展開，詳細闡述。

四、穩定性研究

參照2015版藥典四部9001原料藥物與制劑穩定性試驗指導原則對處方工藝涉及工藝變更品種進行穩定性試驗考察。穩定性期間的溶出曲線與原研品對比情況要著重考查。

通過對自研產品與參比制劑進行穩定性試驗考察，進一步了解制劑在相應的儲存條件下，是否同樣能夠與參比制劑質量水平一致，保證產品在效期內安全有效。

五、BE樣品制備，提出BE申請，提交BE備案材料。

  （1）BE樣品制備

生物等效性試驗用樣品的生產規模應在擬定的商業化生產線和生產設備上生產，處方，生產工藝、生產設備應與商業化生產一致。（出處：化學藥BE試驗備案信息表三、處方工藝中技術要求原文；下載地址：

http://be./index.dhtml ）

BE備案信息表中如果處方工藝填寫過于簡單，生產人員無法按所填寫信息進行生產，在完成BE試驗后，將以信息不充分不予批準。

商業化生產產品的處方、工藝、原輔料質控要求、生產設備應與生物等效性試驗樣品一致，如果發生改變，按上述要求重新開展藥學研究，并經倫理委員會批準，重新進行備案后，使用發生變更后的產品再次開展生物等效性試驗。

  （2）提交BE備案材料

登陸國家食品藥品監督管理總局“化學藥BE試驗備案信息平臺”（www.），按要求填寫備案信息，提交備案資料，獲取備案號。（在填寫備案信息前，注冊申請人需將試驗方案提請承擔BE試驗的藥物臨床試驗機構倫理委員會倫理審查，并與藥物臨床試驗機構簽署BE試驗合同。）

  （3）待BE試驗內容結束后，如能夠證明自制產品與參比品有效性一致時，可按照藥品注冊補充申請程序向國家局同時提交評價結果及調整處方、工藝的資料；如不一致，重新研究處方工藝，重新進行BE試驗。

    小結：確定好處方工藝，同時充分考察BE樣品和原研的一致性，提交相應的BE試驗備案材料，準備迎接BE試驗。

七、BE 實驗（待續）

八、特別提示：時間緊迫

國家局一直是否重視藥品研發及生產過程中數據真實性、完整性及可溯源性，故當下定要合規、完整、系統地完成此次一致性評價工作，不僅是對國家局負責，更是對未來用藥的大眾健康負責。從目前看來一致性評價工作時間緊迫。

附：色譜數據和圖譜提交要求

    藥品注冊申報資料所附的色譜數據和圖譜的紙面文件可參照中心發布的《藥品研究色譜數據工作站及色譜數據管理要求（一）》的相關內容準備，建議對每項申報資料所附圖譜前面建立交叉索引表，說明圖譜編號、申報資料中所在頁碼、圖譜的試驗內容。

    用于準備藥品注冊申報資料的色譜數據的紙面文件應采用色譜數據工作站自動形成的輸出文件形式，內容應包括如下相關信息：

    1.標明使用的色譜數據工作站，并保留色譜數據工作站固有的色譜圖譜頭信息，包括：實驗者、試驗內容、進樣時間、運行時間等，進樣時間（指injection time）精確到秒，對于軟件本身使用 “acquired time”、“作樣時間”、“試驗時間”等含糊表述的，需說明是否就是進樣時間。
    2.應帶有存盤路徑的數據文件名。這是原始性、追溯性的關鍵信息，文件夾和文件名的命名應合理、規范和便于圖譜的整理查閱。
    3.色譜峰參數應有保留時間（保留到小數點后三位）、峰高、峰面積、定量結果、積分標記線、理論板數等。

    申報資料的色譜數據的紙面文件還應包括色譜數據的審計追蹤信息（如色譜數據的修改刪除記錄及原因）。

后記：

在本文完推送之前，在CFDA網站上3月28日出現了：總局辦公廳公開征求仿制藥質量和療效一致性評價工作程序及化學藥品仿制藥口服固體制劑一致性評價申報資料要求意見  。在這征求意見稿里對一致性評價的申報資料進行了詳細的要求。我們暫不對此做任何評價，就其要求做了一個簡要的流程供大家參考： 

附詳細工作計劃

本文已經原作者授權發表，版權歸原作者所有。

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