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    植物組培外植體消毒詳解

     昵稱46419158 2017-08-15

    植物組培外植體消毒詳解

     

       

     

     

     

    外植體的消毒

     

        

    植物組織培養用的外植體大部分取自田間,表面上附著大量的微生物,這是

    組織培養的一大障礙。

    因此在材料接種培養前必須要消毒處理,

    消毒一方面要求

    把材料表面上的各種微生物殺滅,

    同時又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影

    響其生長。因此,外植體的消毒處理是植物組織培養工作中的重要一環。

     

        

    1

    )常用的消毒劑

     

        

    常用的消毒劑如下表所示。理想的消毒劑應具有消毒效果好,易被無菌水沖

    洗掉或能自行分解,對材料損傷小,對人體及其他生物無害,來源廣泛,價格低

    廉。

     

        

    常用消毒劑的使用方法及效果

     

        

    ①酒精

     

        

    酒精是最常用的表面消毒劑,以

    70%~75%

    酒精殺菌效果最好,

    95%

    或無水

    酒精會使菌體表面蛋白質快速脫水凝固,

    形成一層干燥膜,

    阻止了酒精的繼續滲

    入,殺菌效果大大降低。

     

        

    酒精具有較強的穿透力,使菌體蛋白質變性,殺菌效果好。同時它還具有較

    強的濕潤作用,

    可排除材料上的空氣,

    利于其他消毒劑的滲入。

    但酒精對植物材

    料的殺傷作用也很大,

    浸泡時間過長,

    植物材料的生長將會受到影響,

    甚至被酒

    精殺死,使用時應嚴格控制時間。但酒精不能徹底消毒,一般不單獨使用,多與

    其他消毒劑配合使用。

     

        

    ②升汞

     

        

    又稱氯化汞,

    Hg2+

    可以與帶負電荷的蛋白質結合,使蛋白質變性,從而殺死

    菌體。

    升汞的消毒效果極佳,

    但易在植物材料上殘留,

    消毒后需用無菌水反復多

    次沖洗。升汞對環境危害大,對人畜的毒性極強,使用后應做好回收工作。

     

        

    ③次氯酸鈉

     

        

    次氯酸鈉是一種較好的消毒劑,它可以釋放出活性氯離子,從而殺死菌體。

    其消毒能力很強,不易殘留,對環境無害。但次氯酸鈉溶液堿性很強,對植物材

    料也有一定的破壞作用。

     

        

    ④漂白粉

     

        

    漂白粉的有效成分是次氯酸鈣

    [Ca(ClO)2]

    ,消毒效果很好,對環境無害。它

    易吸潮散失有效氯而失效,故要密封保藏。

     

        

    ⑤過氧化氫

     

        

    也稱雙氧水,消毒效果好,易清除,又不會損傷外植體,常用于葉片的消毒。

     

        

    ⑥新潔爾滅

     

        

    這是一種廣普表面活性消毒劑,對絕大多數植物外植體傷害很小,殺菌效果

    好。

     

        

    2

    )消毒方法

     

        

    ①莖尖、莖段及葉片等的消毒

     

        

    消毒前先對植物組織進行修整,去掉不需要的部分,然后用自來水沖洗。對

    于一些表面不光滑或長有絨毛的材料,

    可用洗滌劑清洗,

    必要時用毛刷充分刷洗,

    硬質材料可用刀刮。

     



         

    消毒時在超凈臺上操作,先用

    70%

    酒精浸泡

    10~30s

    以無菌水沖洗

    2~3

    次,

    然后按材料的老、嫩和枝條的堅實程度,分別采用

    2%

    次氯酸鈉浸泡

    10~15min

    或用

    0.1%

    升汞浸

    5~10min

    。消毒時要不斷攪動,使植物材料與消毒劑充分地接

    觸。

    若材料有絨毛,

    最好在消毒液中加入幾滴

    Tween-20

    最后用無菌水沖洗

    3~5

    次。

     

        

    ②果實及種子的消毒

     

        

    先用自來水沖洗

    10~20min

    ,再用酒精迅速漂洗一下。果實用

    2%

    次氯酸鈉浸

    10min

    ,后用無菌水沖洗

    2~3

    次。種子則先用

    10%

    次氯酸鈉浸泡

    20~30min

    ,難

    以消毒的可用

    0.1%

    升汞消毒

    5~10min

    。對于種皮太硬的種子,也可預先去掉種

    皮,再用

    4%

    次氯酸鈉浸泡

    8~10min

     

        

    ③花藥的消毒

     

        

    用于組織培養的花藥多未成熟,其外面有花萼、花瓣或穎片保護,處于無菌

    狀態。

    消毒時將整個花蕾或幼穗用

    70%

    酒精浸泡數秒鐘,

    然后用無菌水沖洗

    2~3

    次,再在漂白粉中浸泡

    10min

    ,最后用無菌水沖洗

    2~3

    次。

     

        

    ④根及底下部器官的消毒

     

        

    由于這類材料生長于土壤中,表面帶菌量大,消毒較為困難。可先用自來水

    沖洗,

    軟毛刷刷洗,

    用刀切去損傷及污染嚴重部位,

    再用酒精漂洗后,

    置于

    0.1%

    升汞中浸

    5~10min

    2%

    次氯酸鈉中浸

    10~15min

    ,最后用無菌水沖洗

    3

    次。

     

        

    在操作時要根據材料的大小、幼嫩、質地等差異做出判斷后,再選擇適宜的

    消毒劑種類、

    濃度和消毒時間,

    切不可生搬硬套。

    消毒的最佳效果應以最大限度

    地殺死材料上的微生物,而又對材料的損傷最小為好

      


     

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