【原創】生化檢驗異常反應曲線解析----底物耗盡

在審報告單時，是否出現過這種情況，即肝功其他指標異常，肝損傷嚴重，而轉氨酶（如ALT、AST）測值反倒正常，把該病人標本稀釋后測定，轉氨酶則很高，遠遠超過線性范圍。

那么這種現象我們要查看標本反應曲線，確定是否出現底物耗盡。

強調說明下，底物耗盡只有速率法會出現這種情況（包含速率法A和兩點速率法）。

下圖為酶動力學反應曲線：

在零級反應期，底物過量，酶催化底物活性達到最大，吸光度變化速度恒定，單位時間內的吸光度變化值才與酶活性成正比。

正常應該是這樣，吸光度讀數點均在零級反應期內。

當樣本中酶的活性遠超過試劑盒提供的線性范圍時，零級反應期非常短，不能有效的完成速率法檢測，此為底物耗盡。常見的有三種情況：

1、樣本中酶的活性遠超線性范圍，底物幾乎是瞬間被耗盡，零級反應期極短，設定的常規吸光度讀數點完全不在零級反應期內，即反應界限內的吸光度點數零，此時甚至可能會測出負值（很容易就能發現）；

2、樣本中酶的活性超過線性范圍較多，底物在較短時間內是被耗盡，零級反應期較短，設定的常規吸光度讀數點大部分不在零級反應期內，此時會造成結果嚴重偏低（不易發現，故可能導致嚴重后果）；

如下圖，

紅色的是讀數點，可以看到讀數點完全不在零級反應期內

3、樣本中酶的活性超過線性范圍并不多，底物耗盡需要相當的時間，零級反應期相對上述兩種情況要長，設定的常規吸光度讀數點僅有小部分不在零級反應期內，此時依然會造成結果偏低但沒有2那么嚴重（不易發現，也不會太嚴重）。

底物耗盡參數如何設置

如下圖為日立全自動生化分析儀7180參數設置界面

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如果是下降反應，建議Abs.Limit設置為4500（經驗值，不同項目會存在差異），如果測光點范圍內吸光度低于4500（會再加上樣本與試劑產生的背景吸光度），則不用于結果計算。

如果是上升反應，建議建議Abs.Limit設置為25000，如果測光點范圍內吸光度高于25000，會有相應數據報警，

出現底物耗盡解決方法

如果出現底物耗盡，首先把標本稀釋后測定；另外在全自動生化分析儀里面設置數據報警攔截，如果該標本出現底物耗盡，則該結果不往LIS里面傳輸，便于發現異常結果和避免漏檢發生。