雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的意義及應(yīng)用

相關(guān)服務(wù)：雜交瘤細(xì)胞測(cè)序

在雜交瘤細(xì)胞制備的過(guò)程中，經(jīng)過(guò)單克隆篩選后，雜交瘤細(xì)胞應(yīng)盡快凍存，但雜交瘤細(xì)胞在凍存過(guò)程中有丟失高特異性高活性的風(fēng)險(xiǎn)，或者細(xì)胞狀態(tài)不好乃至死亡。為了解決這個(gè)問(wèn)題，可以對(duì)篩選得到的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序。

 

 

雜交瘤測(cè)序意義：經(jīng)過(guò)雜交瘤測(cè)序，可以獲得相應(yīng)的序列，在以后項(xiàng)目中有需要用到單克隆抗體的時(shí)候，可以利用測(cè)得的基因序列進(jìn)行重組抗體的制備。解決了雜交瘤保存過(guò)程中，細(xì)胞死亡或高特異性丟失的問(wèn)題。雜交瘤測(cè)序，對(duì)于進(jìn)一步的大規(guī)模生產(chǎn)及抗體的人源化等生物工程操作同樣具有重要的意義。

雜交瘤測(cè)序的常規(guī)流程：

● 雜交瘤細(xì)胞RNA抽提

● 5’RACE反轉(zhuǎn)錄

● cDNAPCR獲得抗體重鏈/輕鏈可變區(qū)基因

● 重鏈及輕鏈可變區(qū)基因克隆測(cè)序

● 生物信息學(xué)分析測(cè)序結(jié)果，剔除非功能抗體基因

● 得到抗體序列

 

 

雜交瘤測(cè)序優(yōu)勢(shì)：相較于直接對(duì)抗體進(jìn)行基于蛋白質(zhì)分析的測(cè)序相比，得益于基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，雜交瘤測(cè)序可以提供更準(zhǔn)確更可靠的結(jié)果，防止蛋白測(cè)序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區(qū)分等潛在風(fēng)險(xiǎn)。

雜交瘤測(cè)序的應(yīng)用：為申請(qǐng)保護(hù)性專利提供有權(quán)單抗序列信息永久保留單克隆抗體序列信息，防止雜交瘤細(xì)胞丟失單抗信息表達(dá)純度更高的重組單克隆抗體縮短雜交瘤細(xì)胞克隆化耗時(shí)過(guò)程，加速單克隆抗體產(chǎn)生速度構(gòu)建工程化抗體親和力成熟，進(jìn)一步提高單抗的親和力構(gòu)建嵌合抗體或人源化抗體。