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    ELISA常見樣本的處理方法

     ypgao 2018-08-06


    ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。 利用ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等,這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面就常見ELISA血液樣本處理方法的整理,希望對您有所幫助。


    血液采取后應盡快進行處理,使血清(漿)從與血細胞接觸的全血中分離出來。


    血清與血漿的區別:

    血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均等同于血清。


    選擇血清還是血漿樣本?

    由于血清中缺乏很多的凝血因子,但有一些凝血產物,如果是測凝血因子建議選擇血漿樣本;同時血漿中有纖維蛋白原,如果纖維蛋白原對待檢測指標有影響,建議選擇血清樣本。大多數情況下二者均可以選擇。

    處理方法:

    ?  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或 4 度過夜,然后 1000×g 離心 20分鐘,取上清即可。這是一個讓血液自然凝固的過程,溫度溫度越低,凝集越緩慢,可根據需要添加促凝劑。

    ?  血漿:血漿樣本需要抗凝,一般建議用 2.0%EDTA,1%肝素,3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30 分鐘內于2 ~8度 1000 g 離心15 分鐘,取上清即可檢測。根據待檢測目標物的性質不同選取不同的抗凝劑。


    處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應小于 1 周,-20 度不應超過 1 個月,-80度不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫,不應加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的第一步, ,以上就是關于常見樣本處理方法的一個簡述,供研究者參考。


    聯科提醒:
     

    如果您選擇的
    抗凝劑是
    請注意
    枸櫞酸鈉
    (檸檬酸鈉)
    Ca2+有凝血作用,枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,從而阻止血液凝固。配成109mmol/L 的濃度和血液1:9,106mmol/L 的濃度和血液 1:4。
    缺點:血液中溶解度低,抗凝作用較弱。
    優點:對凝血因子有很好的保護作用,大部分凝血試驗都可用枸櫞酸鈉抗凝。
    乙二胺四乙酸(EDTA)鹽
    與血液中的鈣離子結合形成配位化合物,從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10。
    優點:對紅細胞和白細胞形態影響小。
    缺點:影響血小板的聚集。不適用于凝血實驗和血小板功能相關實驗的檢測。
    肝素
    通過與抗凝血酶Ⅲ結合,增強抗凝血酶的作用,滅活絲氨酸蛋白酶,從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L與血液 1:10。
    優點:抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。
    缺點:引起白細胞聚集。肝素抗凝血應于短時間內使用,否則放置過久血液又可凝固。

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