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緊接上文，本文將主要討論羊肚菌菌種分離中的孢子分離技術(shù)。 孢子分離既可以用有性孢子也可以用無性孢子作為分離材料。在適宜的條件下，使孢子萌發(fā)而獲得純培養(yǎng)菌絲體的過程即稱之為孢子分離法。羊肚菌的有性孢子即子囊孢子，無性孢子即菌霜，由于羊肚菌無性孢子的具體功能扮演著不動(dòng)精子的作用，極難以萌發(fā)，因此對(duì)與羊肚菌而言，孢子分離僅指有性孢子子囊孢子的分離。 羊肚菌的多孢分離是在沒有遺傳育種基礎(chǔ)理論的前提下的一種菌種選育手段。有性孢子是經(jīng)過減數(shù)分裂的子代，子代的性狀相對(duì)于親本而言必然已經(jīng)發(fā)生未知的遺傳變異（所謂是龍生九子各不同），多孢分離獲得分離物是各種遺傳性狀混合的混合體，從混合體的出菇群體中選擇性狀優(yōu)良的菌株進(jìn)行組織分離，之后進(jìn)行后續(xù)的品種選育實(shí)驗(yàn)是羊肚菌多孢分離遺傳育種的基本流程。由于孢子分離獲得是確定的遺傳性狀變異的分離物，因此不建議大規(guī)模生產(chǎn)使用。 羊肚菌多孢分離具體操作流程： 1，材料及用具的準(zhǔn)備：100mL的錐形瓶、棉花塞子、回形針、解剖刀或剪刀、鑷子、吹風(fēng)機(jī)、待分離的羊肚菌標(biāo)本，PDA培養(yǎng)基制作所需藥品及器具等；
2，制作PDA瓊脂培養(yǎng)基（制作方法百度搜索視頻即可），將培養(yǎng)基約30mL置于三角瓶內(nèi)； 3，將回形針制作成“Z”字形掛鉤，掛在錐形瓶上，蓋上塞子，塞子用牛皮紙或舊報(bào)紙捆著封口； 4，121℃，高壓蒸汽滅菌30min；冷卻后備用； 5，以下操作在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成：用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹去羊肚菌菌蓋表面的附著物和雜菌；之后用無菌的剪刀或解剖刀切取長寬0.5 ~ 1 cm的小塊，凹坑朝下，鉤在無菌的鐵鉤上，將鐵鉤懸于三角瓶內(nèi)，塞好棉塞；
6，置于23℃下恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，6h后，將三角瓶從培養(yǎng)箱內(nèi)拿出，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將掛鉤連同組織塊取出，繼續(xù)蓋上塞子，23℃培養(yǎng)，2～5天即可見到彈射出的孢子萌發(fā)出的小菌落； 7，仔細(xì)檢查萌發(fā)的菌落，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將菌落挑出至PDA斜面培養(yǎng)基上，獲得多孢分離菌種。 （本文主要摘自《羊肚菌生物學(xué)與栽培技術(shù)》） |
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