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    干貨:最全面的干細胞研究marker

     我愛你文摘 2019-05-08

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    人生小哲理干細胞者說

    不貶不褒

    如實陳述

    方為科普之道

    正文

    關(guān)于干細胞標志物的故事,很有意思也很有用!推薦學習!

    來源:賽默飛

    什么是干細胞?

    入門者可以自學下圖

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    進階版可學習下圖

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    圖1.誘導多潛能干細胞 (iPSC) 和胚胎干細胞 (ESC)的自我更新和分化形成的新細胞類型

    目前鑒定干細胞的主要方法有哪些呢?

    一般有三種:傳統(tǒng)AP 染色鑒定形態(tài)、核酸方法鑒定(qPCR 檢測基因表達、染色體核型分析、轉(zhuǎn)座因子分析、DNA 甲基化分析),還有基于抗體的蛋白鑒定方法(如免疫熒光、免疫印跡、流式細胞術(shù)等應用)。

    每種干細胞的經(jīng)典標志物有哪些?

    鑒定每種類型的干細胞,首先要知道對應的標志物有哪些。以下整理出每種類型細胞對應的經(jīng)典marker和部分抗體。

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    為了維持未分化的干細胞狀態(tài),iPSC和ESC均需要關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達,如Nanog和OCT4,它們會調(diào)節(jié)對細胞分裂、分化和發(fā)育至關(guān)重要的基因。除了這些轉(zhuǎn)錄因子之外,通常PSC還會表達一組特定的細胞表面蛋白(如TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA3和SSEA4)。

    對這些標志物的檢測是鑒定iPSC和ESC的第一步。一般使用抗體對這些多能性marker進行免疫熒光染色。

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    左:DyLight 488標記的抗SSEA5(貨號MA1-144-D488,綠色)和DyLight 650標記的抗SSEA4(貨號MA1-021-D650,紅色)。中:DyLight 488標記的抗Lin28(MA1-016-D488)。右:DyLight 650標記的抗Sox20 (MA1-014-D650)。細胞核DNA使用Invitrogen DAPI(貨號D1306)。

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    表1: 常用多能干細胞標志物的抗體

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    PSC有可能分化成以下三個胚胎胚層的細胞:外胚層、中胚層和內(nèi)胚層,這些胚層可以進一步發(fā)育成各種分化的細胞類型。

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    表2:代表性內(nèi)胚層、中胚層、外胚層標志物

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    多能干細胞會分化成神經(jīng)譜系細胞,包括神經(jīng)干細胞、膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、少突細胞和神經(jīng)元。

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    圖3. PSC分化為神經(jīng)譜系的路徑

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    表3.神經(jīng)干細胞、膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元標志物

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    造血干細胞(HSC)是多能細胞,可以生成血液中的所有細胞類型,包括B和T淋巴細胞、自然殺傷細胞、樹突細胞、單核細胞、血小板和紅細胞。HSC非常小并且是非貼壁細胞,這使得它們很難純化或通過顯微鏡觀察。靜止狀態(tài)時,HSC可見于紅骨髓。通常用流式細胞術(shù)鑒定HSC表面抗原,一般要用10至14個抗體配色組合。重編程技術(shù)和人PSC的造血分化的最新進展為研究造血發(fā)育和模擬血液疾病創(chuàng)造了全新的機會。

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    圖4. 造血干細胞分化示意圖

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    表4.代表性造血干細胞標志物

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    間充質(zhì)干細胞(MSCs)是多能細胞,可以分化成許多細胞類型,包括骨骼、脂肪、軟骨、肌肉和皮膚。MSC最初是從骨髓樣本中分離出來的,但最近它們已經(jīng)在許多其他類型的組織中被發(fā)現(xiàn),生成一個具有高分化可能性的異質(zhì)且豐富的細胞群。MSC在治療各種疾病(比如心血管疾病和克羅恩病)中的可能性是目前干細胞研究的一個熱門課題。

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    圖5.間充質(zhì)干細胞的分化可能性

    根據(jù)國際細胞治療協(xié)會(ISCT)提出的基于體外培養(yǎng)細胞特征的標準,MSC不表達CD34、CD45、CD14、HLA-DR、CD11b和CD79a,表達表面標記物CD73、CD90和CD105。

    體內(nèi)研究表明,MSC的陽性指標是CD146、Stro-1、CD90、CD105、CD44和CD73,陰性指標是CD45、CD11b和CD14。

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    表5.間充質(zhì)干細胞標志物

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    圖6. 體外PSC分化以產(chǎn)生β細胞和肝細胞樣細胞的示意圖

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    表6. 胰腺和肝臟細胞系標志物

    查看完整干細胞標志物,輸入網(wǎng)址:www.thermofisher.com /stemcellabs,即可瀏覽,或免費下載干細胞研究抗體海報。

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