背景[1][2]野菊花（Flower of Indian Dendranthema,Wild chrysanthemum）為菊科多年生草本植物野菊的頭狀花序，外形與菊花相似。產(chǎn)品以色黃無梗、完整、氣香、花未全開者為佳。野菊花可廣泛用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、風(fēng)火赤眼、頭痛眩暈等病證。同時又有很好的降壓作用，可用于高血壓病的輔助治療。 蒙花苷是野菊花的特征性化學(xué)成分，也是野菊花中活性最高的黃酮類成分，分子式為C28H32O14，分子量為592.54，屬于Flavonoids黃酮類，基于蒙花苷是野菊花的特征性化學(xué)成分，因此，如果能以蒙花苷作為該藥材及其相關(guān)制劑的質(zhì)量評價指標(biāo)，既能較真實(shí)地反映其質(zhì)量又具有專屬性，可對野菊花藥材及其制劑的質(zhì)量控制起到重要作用。 目前有關(guān)于野菊花中蒙花苷提取方法主要涉及回流提取法、堿提醇沉法等方法，純化方法主要涉及高效制備液相色譜法、大孔吸附樹脂等方法。例如一種從野菊花中分離得到蒙花苷單體的方法，具體實(shí)驗(yàn)方案為：將野菊花藥材用乙醇溶液回流提取，收集濾液，將濾液濃縮后靜置析晶并烘干沉淀，將沉淀以甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，過濾，收集過濾固體，烘干，經(jīng)烘干后的固體中，加入有機(jī)溶劑溶解，過濾，收集濾液，經(jīng)高效制備液相色譜分離，針對性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液，蒙花苷單體析出后經(jīng)干燥得到蒙花苷單體產(chǎn)品。 該方法需經(jīng)制備液相色譜分離，操作復(fù)雜，成本較高，很難進(jìn)行大量制備。還有研究提供了一種從野菊花中分離得到蒙花苷單體的方法，該方法工藝復(fù)雜，需要加入酸堿，容易破壞化合物結(jié)構(gòu)，需經(jīng)大孔吸附樹脂，費(fèi)時費(fèi)溶劑，且結(jié)晶收率低。就現(xiàn)有技術(shù)而言，還需對從野菊花中提取分離蒙花苷工藝進(jìn)行改進(jìn)，才能很好地滿足實(shí)際生產(chǎn)需求。 結(jié)構(gòu)藥理作用及應(yīng)用 [3][4][5]蒙花苷，其英文名為Linarin，屬于黃酮類化合物。蒙花苷具有抗金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌、抗衰老作用、抗缺氧作用、抗不良刺激作用、對機(jī)體雙向調(diào)節(jié)作用、抗疲勞作用、抑制血糖升高作用 、毒性及致突變性致畸方面的研究、對學(xué)習(xí)記憶影響作用。 蒙花苷具有非常廣泛的生理和藥理活性，對預(yù)防糖尿病和改善糖尿病有顯著的作用還具有抑制磷酸二酯酶、醛糖還原酶、金黃色葡萄球菌、乙型溶血鏈球菌、抗菌等作用，能保護(hù)肝臟，并對慢性氣管炎有一定療效。如蒙花苷能降低高血糖小鼠血糖，同時可改善糖尿病小鼠的糖耐量、降低糖尿病小鼠血清丙二醛、總膽固醇及甘油三酯的含量，且無毒副作用，因此蒙花苷可用于糖尿病、高血脂相關(guān)的藥物、食品或食品及藥物組合物。 此外還可以利用蒙花苷制備其他化合物，如酶法水解蒙花苷制備金合歡素，金合歡素是野菊花中一種高活性的苷元成分，在野菊花中含量非常低，絕 大部分都以其糖苷形式存在，故從植物中直接抽提并不是有利的工業(yè)制備方法。蒙花苷是金合歡素的二糖苷，在野菊花、菊花、密蒙花等中草藥中含量較高，兩者區(qū)別在于金合歡素的C-7位上連接了一分子6-脫氧-α-L-吡喃鼠李糖基-(1 →6)-β-D-葡萄吡喃糖。 盡管目前通過水解蒙花苷制備金合歡素的案例較少，但是這也可能成為一種制備金合歡素的有效途徑。方法包括制備粗酶液、 酶解和純化步驟，具體為：1)粗酶液的制備：將纖維化纖維細(xì)菌接種于液體培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)40h， 9000g離心10min后取上清，進(jìn)行硫酸銨沉淀，收集20％-40％的組分，用緩沖液重新溶解即得；2)酶解：以蒙花苷為原料，利用溶解后的粗酶液對其轉(zhuǎn)化，使7位的β-D- 葡萄糖苷鍵被水解得到金合歡素. 具體方法為：取蒙花苷置于反應(yīng)瓶中，按照 10：1：2：0.1的體積比加入緩沖液、助溶劑、粗酶液與激活劑后共孵育；反應(yīng)體系中蒙花苷濃度為0.1-0.5mM，緩沖液為20-50mM，助溶劑的濃度為2-10 mM，酶量為5-10mg/ml，激活劑濃度為2-20mM，pH值為5.0-11.0，反應(yīng)溫度 為20-40℃，反應(yīng)時間為1-6h；3)金合歡素的制備：待反應(yīng)結(jié)束后，將上述轉(zhuǎn)化液與2倍體積的甲醇混合，加熱至60度重復(fù)提取3-5次，收集提取液冷卻結(jié)晶即得到金合歡素。 制備[7][6]方法1：一種從野菊花中提取蒙花苷的方法，包括以下步驟：步驟1：將野菊花粉碎并過三號篩后與硅藻土混合，野菊花和硅藻土的重量比為1:1；步驟2：采用ASE萃取法萃取蒙花苷，收集萃取液，其中，ASE萃取法所采用的萃取溶劑為甲醇. 步驟2包括以下子步驟：S1：在萃取池的底部墊3-6張濾紙，再加入硅藻土作為底層；S2：向萃取池中加入步驟1所得到的野菊花和硅藻土的混合物；S3：向萃取池中加入適量的硅藻土作為表層；S4：采用甲醇進(jìn)行萃取；其中，萃取參數(shù)為：萃取溫度100℃；循環(huán)次數(shù)2次；靜態(tài)萃取時間10min；沖洗體積100％；吹掃時間60s；步驟3：將萃取液進(jìn)行離心分離得到含有蒙花苷的上清液。 方法2：一種蒙花苷單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟： 1）提取：將野菊花藥材粉碎成直徑3mm的粗粉，按照藥材重量:乙醇溶液體積=1Kg:10L計算，加入體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小時，過濾，收集、合并濾液；經(jīng)乙醇回流提取得到的提取液即濾液中主要含有蒙花苷、色素和極性類雜質(zhì)成分。 2）濃縮：將步驟（1）收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至原濾液體積的10%，常溫下靜置析晶10～12小時，過濾收集沉淀，除去濾液，將沉淀60℃烘干后進(jìn)行下一步洗滌處理；經(jīng)濃縮后的濾液中主要含有色素和大分子極性類雜質(zhì)成分。 3）溶劑洗滌：向步驟（2）經(jīng)烘干后的沉淀中加入10倍量體積的甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過濾，收集過濾固體，60℃烘干后待下一步處理；經(jīng)洗滌后的濾液層主要含有色素和小極性類雜質(zhì)。 4）溶解、過濾：將步驟（3）經(jīng)烘干后的固體中，按照固體物質(zhì)量:溶劑體積=1g:10mL，加入有機(jī)溶劑溶解，溶解后的溶液用有機(jī)膜過濾，濾除顆粒雜質(zhì)，收集濾液；所述有機(jī)溶劑為吡啶、四氫呋喃或DMF。 5）高效制備液相色譜分離：取步驟（4）所得的濾液進(jìn)樣，用反相高效液相色譜法（RPHPLC）制備分離蒙花苷單體，紫外檢測器在線監(jiān)測，針對性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液； 主要參考資料[1] CN201510029603.9 一種從野菊花中提取分離蒙花苷工藝 [2] 柴紅玲, 吳林森, 金曉春. 野菊花天然活性成分蒙花苷的提取[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 50(8): 1663-1665. [3] CN201510029603.9 一種從野菊花中提取分離蒙花苷工藝 [4] CN201610989095.3 蒙花苷的醫(yī)藥保健用途 [5] CN201510451784.4 一種酶法水解蒙花苷制備金合歡素的方法 [6]CN201510243008.5 從野菊花中提取蒙花苷的方法 [7] CN201210577503.6 一種蒙花苷單體的分離純化方法 |
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