流式通道主要可以分為散射光通道和熒光通道。 流式細胞儀中能測定兩種方向的散射光信號,即FSC(前向角散射)和SSC(側向角散射)。 FSC的值代表細胞的大小:細胞體積越大,其FSC值就越大。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小,利用FSC值對細胞進行分群和分類。 SSC的值代表細胞的顆粒度:細胞越不規則,細胞表面的突起越多,細胞內能夠引起激光散射的細胞器或者顆粒性物質越多,其SSC值就越大。所以可以利用細胞的SSC值初步比較細胞的顆粒度,利用SSC值對細胞進行分群和分類。 因此,根據不同的FS 和 SS可將這些細胞分成不同的細胞群。樣品細胞不需要標記任何熒光素偶聯抗體,直接上樣分析就可以得到樣品細胞的FSC值和SSC值,其值代表的是細胞的大小和顆粒度這兩個基本的物理特征,所以樣品的FSC-SSC散點圖又稱為樣品細胞的 “物理圖”。 熒光通道表示的不是細胞特有的物理特征,而是其化學特征。與根據 FS 和 SS 區分細胞群類似,可根據是否表達特定蛋白區分細胞。這種情況下,通常使用熒光染料對目標蛋白進行染色。用于檢測目標蛋白的熒光染料被相應激發波長的激光激發后會發射熒光。這些被熒光染色的細胞或顆粒會被單獨檢測。熒光通道接收到的信號越強,表示細胞上結合的熒光素越多,那么細胞表面表達的該CD分子就越多,因此可根據熒光信號的強弱判斷細胞表達該CD分子的相對數量。 |
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