【原】影響rAAV實現體內基因操作實驗結果的關鍵

為了實現目的基因在特定的組織中高效表達，需要前期做好實驗規劃。其中最為關鍵的是需要選擇合適的血清型和啟動子。由于rAAV的吸附，入侵，胞內運輸，蛋白酶體降解，入核，脫衣殼等步驟都與衣殼蛋白相關，因此血清型的結構決定rAAV的侵染效率和靶向特異性等基本能力。我們可以根據實驗需求選擇合適的血清型。下表是由小編整理的常見血清型的組織靶向性總結，供大家參考。

特異性啟動子能使目的基因在特定的組織和細胞類型中表達，因此我們可以選用特異性啟動子，進一步提高目的基因遞送的特異性。可以選用一些被改造的特異性啟動子，如融合了增強子序列的特異性啟動子，這些特異性啟動子往往在保證組織特異性的同時也具備較高的啟動活性。同時盡量選用較短長度的啟動子，以此擴大目的基因的裝載容量。下表是由小編整理的常見特異性啟動子及其靶向性總結，供大家參考。

二、專業的實驗操作對注射效果有重要影響

選擇合適和血清型和設計合適的載體只是實驗成功的基本前提，而注射方式、注射劑量和實驗操作等，這些因素也對我們實驗的成敗有著重要的影響。

在注射方式上，分為系統性注射和局部注射。系統性注射又包括尾靜脈注射、腹腔靜脈注射、眼眶靜脈注射和頸靜脈等。局部注射方式常見的包括腦立體定位注射、肌肉定點注射、心肌原位注射、玻璃體腔內注射、關節腔注射等。系統性注射操作簡單，但由于需要依賴病毒在體內隨機擴散到達靶組織，因此其病毒用量較大。局部注射所需的病毒量較少，一般100ul以內，但對滴度要求較高。由于是直接將rAAV注射到目標組織中，因而局部注射會有更好的靶向性。我們可以根據實際的需求來選擇合適的注射方式，下表是小編整理的針對常見注射部位的有效注射方法，供大家參考。

在實際操作過程中，我們需要詳細了解操作步驟和注意細節。特別是一些具有難度的局部注射的方法，這些方法往往涉及開腹、尋找微組織等操作，對實驗條件和操作手法要求較高，稍有失誤，小鼠便會有較大的損傷，最終影響實驗結果。下面給大家介紹幾個注射方式的難點及注意細節。

圖1. 乳鼠顳靜脈注射

圖2. 腦立體定位注射

尾靜脈注射失敗易導致病毒在尾部殘留，影響整體病毒注射量和成像結果（如圖3第4只小鼠）。

圖3. 尾靜脈注射

三、結語

一次成功的rAAV體內的基因操作實驗，需要考慮多方面的因素。前期需要查閱大量的資料選擇血清型和啟動子，設計合理科學的方案，并生產出高滴度高感染效率的rAAV。此外擁有熟練的實驗操作技能和專業素養，才能有效地將rAAV遞送至體內，從而有效實現目的片段的表達。