土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性檢測試劑盒說明書 (貨號：NM-W-0638 微量法100T/48S)

一、產品簡介：

土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC3.1.4.1）是在土壤磷酸單酯酶之后的的第二大磷酸酶。其在土壤有機磷的循環代謝中起到重要作用。

本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的的檢測方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化雙(4-硝基苯)磷酸酯（BNPP）生成黃色的產物PNP，該產物在400nm處有最大吸收峰。通過檢測PNP在400nm下的增加速率，即可得到S-PDE酶活性大小。

二、試劑盒組分與配制：

三、需自備的儀器和用品：

酶標儀、96孔板、臺式離心機、恒溫水浴鍋/培養箱、研缽、天平、可調式移液器、30~50目篩、甲苯、蒸餾水。

四、操作步驟：

建議正式實驗前選取2個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！

1、預實驗樣本制備

新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。

2、標準溶液的配制：把10μmol/mL標準品母液用試劑一稀釋成1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625μmol/mL的標準溶液備用。

3、預實驗上機操作：

① 酶標儀預熱30min以上，調節波長至400nm。

② 操作表：

4、正式實驗：

① 若預實驗測定吸光值超出標準吸光值線性范圍：高于最高值建議將樣本適當稀釋后再進行測定，并將改變后的D代入公式計算；

② 確定好最適實驗條件后，正式實驗樣本制備同預實驗樣本制備；

③ 正式實驗按照預實驗上機操作步驟進行（標準管和空白管預實驗已做，正式實驗可選做）。

五、結果計算：

1、以各個標準溶液的濃度為x軸，其對應的ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程得到x（μmol/mL）。

2、活性計算：

單位定義：在37℃，每克土壤每小時水解BNPP產生1nmolPNP定義為1個酶活單位（U）。

S-PDE活性(U/g土樣)=x×V×10³÷W÷T×D=220×x÷W×D

T：催化反應時間，1h；                   V：反應階段反應體積，0.22mL；

W：土壤樣品質量，g；                   D：稀釋倍數，未稀釋即為1。