王世恩 1,2圖力古爾 1,2  （1. 吉林農業大學菌物學院， 長春 130118； 2. 農業農村部北方食用菌資源利用重點實驗室， 長春 130118 ） 摘 要 對野外調查中采自我國海南、湖南的蘑菇屬真菌進行研究和鑒定，發現蘑菇屬較小蘑菇亞屬1新種，即棕毛蘑菇Agaricus brunneopilosus T. Bau & S.E. Wang。新物種特征為菌蓋具土棕褐色、紅棕色、巧克力棕色纖維質鱗片，緣生囊狀體長球莖狀、近球形或寬棒狀。基于ITS、nrLSU和TEF1序列進行多基因系統發育分析，結果表明：該物種屬于蘑菇屬Agaricus 較小蘑菇亞屬Subg. Minores 較小蘑菇組Sect. Minores。文中提供了新物種的形態學描述和線條圖，并討論了與相似物種的區別。蘑菇屬Agaricus L.隸屬于擔子菌門Basidiomycota、蘑菇綱Agaricomycetes、蘑菇目Agaricales、蘑菇科Agaricaceae。至今，全球已記載500多個蘑菇屬物種，其中我國通過分子系統發育分析與形態學特征相結合的方法確認了116種，并且這一數字仍在增長。蘑菇屬真菌為腐生菌，在森林、牧場和草地等環境中廣泛分布。其分類特征為菌褶離生，具菌環，擔孢子暗色。蘑菇屬中包含多種具食藥用價值的物種，如雙孢蘑菇A. bisporus （J.E. Lange） Imbach.，也有一些種類具有抗氧化能力，如丁香蘑菇A. padanus Lancon.，同時一些種類具有毒性，如黃斑蘑菇A. xanthodermus Genev.能引起胃腸炎型中毒。由于環境因素和種內變異的影響，基于宏觀和顯微特征對某些蘑菇屬物種進行鑒定具有很大挑戰性。隨著分子生物學技術的發展，該問題在一定程度上得到緩解。Zhao等于2016年提出新分類系統，依據化石校準分子鐘的方法估計分歧時間，并據此將蘑菇屬劃分為5個亞屬20個組。隨后的研究中，以Zhao 等提出的新分類系統為標準，新的亞屬和組被建立。目前蘑菇屬共包括6個亞屬27個組。本文報道了在我國新發現的蘑菇屬1個新種，即棕毛蘑菇A. brunneopilosus，提供了該物種詳細描述、線條圖、分子信息及其在系統發育樹中的地位。研究材料為2021—2022年間在野外采集獲得。在采集過程中，對子實體的不同部位進行拍照。并記錄子實體的宏觀特征，包括產地、生境、大小、菌肉是否傷變色以及氣味等信息。標本使用烘箱在55 ℃下烘干。憑證標本存放于吉林農業大學菌物標本館（HMJAU）。宏觀形態特征依據新鮮子實體的野外記錄和拍攝的照片進行描述。新鮮子實體顏色描述參考德國RAL勞爾色卡（https：//www.ral-guetezeichen.de/）。顯微特征的觀察依據干標本，通過徒手切片并使用體積分數為5%的KOH溶液或無菌水作為浮載劑，必要時用體積分數為1%的剛果紅溶液染色。利用光學顯微鏡（OLYMPUS BX50）觀察并測量擔孢子、擔子、囊狀體及蓋皮菌絲等結構，繪制線條圖。每個結構至少測量 20 個樣本。“Q”表示擔孢子的長度與寬度之比，“Qv”指所有Q值的平均值。形態學研究及形態特征的描述參考Parra、Kerrigan、Zhao等和李賽飛的研究方法。基因組 DNA 提取使用 NuClean Plant Genomic DNA 試劑盒（北京CWBIO），嚴格按照說明書操作，提取后的DNA保存在 -20 ℃冰箱。分別使用引物對 ITS1F/ITS4、 LR0R/LR7和EF1?983F/EF1?1567R擴增ITS、nrLSU和TEF1序列。PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后，送至生工生物工程（上海）股份有限公司進行純化和測序。在 BioEdit v.7.1.3.0軟件中檢查色譜圖以確保序列質量，并在NCBI數據庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）進行BLAST 搜索，以確認測序結果。將序列提交至GenBank，并下載物種所在亞屬或組的序列（表1）。隨后構建該亞屬的多基因系統發育樹，以確定該物種的系統學位置。蘑菇 A. campestris L.被用作系統發育樹的外類群。利用在線版本MAFFT v7（https：//mafft.cbrc.jp/alignment/software/）對各個區域的序列進行獨立比對，并通過BioEdit v.7.1.3.0軟件進行手動調整，使用 Phylosuite v1.2.2將ITS、nrLSU和TEF1 3個片段組裝完成。表 1 用于系統發育分析的標本信息Table 1 Sequences used in the phylogenetic analysis 注：“T”代表模式標本，粗體代表在本研究中產生的序列 Note：“T” refers to the type specimen. Bold letter refers to the sequences obtained at this study 使用IQ?TREE軟件，在TIM2+F+I+G4模型下（該模型通過ModelFinder v2.2.0，根據BIC準則選出）進行5 000次超快Bootstrap，并采用Shimodaira?Hasegawa?like近似似然比檢驗來推斷最大似然系統發育樹。使用 Mr Bayes 3.2.6，在劃分模型條件下（基于Model Finder v2.2.0和BIC準則選擇最佳擬合分區模型Edge?linked：HKY+F+I+G4用于ITS，HKY+F+I+G4用于nrLSU，SYM+G4用于TEF1），推斷貝葉斯推理系統發育，其中初始25%的采樣數據被丟棄作為預模擬運行，運行了4個馬爾可夫鏈（MCMC），每隔100代采樣1次，直到分裂偏差頻率值<0.01。最后，使用FigTree 1.4.3（http：//tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree/）對生成的系統發育樹進行可視化處理。物種ITS特異性位點是指某一物種的ITS序列在該物種所在組中唯一特異性堿基的位置，表示方式為“xxxxxXxxxxx@位置”，其中 “X”代表唯一特異性堿基，“@位置”表示唯一特異性堿基的位置，“xxxxx”代表側翼字符。如果側翼字符中有空字符，則直接選擇下一個有效的堿基進行描述。特異性位點的確定是基于當前可用序列的組的所有物種進行的，當物種數量發生變化時，可能需要重新評估。用于系統發育分析的數據集由 49個樣本組成，代表了31 個較小蘑菇亞屬Subg. Minores 物種，其中包括21個已知物種、1個新種和9個未命名物種。本研究生成了 9 個序列，包括 5 個ITS、2個 nrLSU 和 2個 TEF1。貝葉斯（BI）樹和最大自然（ML）樹拓撲結構相似，因此，本文顯示了ML樹，并標注了最大自然自檢舉值BS≥50%和貝葉斯后驗概率值PP≥0.70的數值（圖1，“T” 代表模式標本，粗體代表在這項研究中產生的序列，紅色字體代表新物種）。多基因聯合構建的系統發育樹與He 等和Hussain 等的研究結果類似，較小蘑菇亞屬Subg. Minores分為3個組。在多基因系統發育樹中，棕毛蘑菇A. brunneopilosus位于較小蘑菇組Sect. Minores中，且具有獨特的分支位置，支持其作為新物種。圖 1 基于ITS、nrLSU和TEF1序列構建的較小蘑菇亞屬最大似然系統樹Fig. 1 Maximum likelihood phylogram of Subg. Minores constructed by analyzing the ITS, nrLSU and TEF1 sequences棕毛蘑菇Agaricus brunneopilosus T. Bau & S.E. Wang， sp. nov. （Fig. 2-3）圖 2 棕毛蘑菇模式標本子實體（HMJAU 67724）Fig. 2 Type specimen fruiting basidima of Agaricus brunneopilosus （HMJAU 67724）a. 菌褶Fruiting body lamella; b 菌蓋Fruiting body pileus a. 擔子體 Basidiomata；b. 擔孢子 Basidiospores；c. 擔子 Basidia；d. 褶緣緣囊體 Cheilocystidia；e. 菌蓋皮層 Pileipellis 圖3 棕毛蘑菇顯微結構線條圖Fig. 3 Microscopic features of Agaricus brunneopilosusEtymology： The specific epithet 'brunneopilosus’ refers to the brown fibrillose squamules on the surface pileus of this species.Diagnosis： Agaricus brunneopilosus differs from related species by its pileus completely covered clay brown （RAL 8003）， red brown （RAL 8012）， chocolate（RAL8017） fibrillose squamules， cheilocystidia long corm?like， nearly globose or broadly clavate， septate at base.Type： China， Hainan Province： Jianfengling National Forest Park， Ledong Li Autonomous County， 30 June 2021， coll. BAU Tolgor and ZHU Liyang （HMJAU 67724， Holotype！）. GenBank： ITS = OR159498； nrLSU = OR144156； TEF1 = OR166452.Pileus 2.3-5.0 cm diam.， hemisphere to plane， surface dry， light grey （RAL 7035）， beige grey （RAL 7006） background， completely covered by fine fibrils， and forms fibrillose squamules， clay brown （RAL 8003）， red brown （RAL 8012）， chocolate （RAL 8017）， denser at disc， scattered towards the margin radially， margin appendiculate by annulus remnants. Context up to 0.3-0.6 cm thick， pure white （RAL 9010）. Odour of almonds. Lamellae 0.2-0.4 cm broad， beige grey （RAL 7006）， brown grey （RAL 7013） to grey brown （RAL 8019）， free， crowded， unequal， lamellulae intercalated. Stipe 3.9-4.5 cm long， 0.6-1.5 cm thick， nearly cylindrical with bulbous base， with pure white （RAL 9010） rhizoids， hollow， pure white （RAL 9010） and beige （RAL 1000）， fluorescent yellow （RAL 1026） on touching or bruising （especially at base）， smooth above the annulus， and with pure white （RAL 9010） flocculent squamules below the annulus. Annulus superior， simple， with fibrillose on the lower surface， membranous， pure white （RAL 9010） and beige （RAL 1000）.Basidiospores 3.6-4.3 × 5.1-6.0 μm， Q=1.28-1.65，Qv=1.46， broadly?ellipsoid to elongate?ellipsoid， smooth， black brown， thick?walled， guttulate. Basidia 7-8 × 13-19 μm， clavate， with 4（2） sterigmata， 2-3 μm long， smooth， light brown. Cheilocystidia 7-17 × 25-41 μm， abundant， long corm?like， nearly globose or broadly clavate， septate at base. Pileipellis a cutis of cylindrical hyphae， 6-12 μm wide， slightly constricted at septa.Ecology and distribution： Solitary on soil， in broad?leaved forest in summer. Currently， only known in Hainan and Hunan Provinces， China.Species?specific ITS markers in Sect. Minores： aatgtGtatac@310， tgctcActgtg@690.Additional specimens examined： China， Hunan Province： Yuelu Mountain， Changsha City， 9 July 2022， coll. CHENG Hong （HMJAU 67725）.詞源：新種拉丁名種加詞“brunneopilosus” 代表該物種的菌蓋具棕色纖維質鱗片，故此命名。特征集要：棕毛蘑菇Agaricus brunneopilosus與近緣種的區別在于其菌蓋具土棕褐色（RAL 8003）、紅棕色（RAL 8012）、巧克力棕色（RAL 8017）纖維質鱗片，緣生囊狀體長球莖狀、近球形或寬棒狀，基部具隔膜。菌蓋直徑2.3~5.0 cm，半球形至平展，表面干燥，淺灰色（RAL 7035）、米灰色（RAL 7006）、中部顏色深，具土棕褐色（RAL 8003）、紅棕色（RAL 8012）、巧克力棕色（RAL 8017）纖維質鱗片，中部密，向邊緣放射狀散開，邊緣具菌幕殘余。菌肉厚 0.3~0.6 cm，純白色（RAL 9010）、杏仁氣味。菌褶褶幅0.2~0.4 cm，米灰色（RAL 7006）、棕灰色（RAL 7013）至灰棕色（RAL 8019），離生，密，不等長，具小菌褶。菌柄長3.9~4.5 cm，粗0.6~1.5 cm，近圓柱形，純白色（RAL 9010）、米黃色（RAL 1001），表面摩擦呈熒光黃（RAL 1026），空心，基部膨大，具純白色（RAL 9010）假根，菌環以上光滑，菌環以下具純白色（RAL 9010）絮狀鱗片。菌環生于菌柄上部，單層，下表面具絨毛，膜質，純白色（RAL 9010）、米黃色（RAL 1001）（圖2）。擔孢子3.6~4.3 × 5.1~6.0 μm，Q=1.28~1.65，Qv=1.46，寬橢圓形至長橢圓形，光滑，黑棕色，厚壁，內含油滴。擔子7~8 × 13~19 μm，棒狀，具4（2）小梗，小梗長2~3 μm，光滑，淺棕色。緣生囊狀體7~17 × 25~41 μm，豐富，長球莖狀、近球形或寬棒狀，基部具橫隔。菌蓋菌絲表皮型 （“cutis”型），橫隔處稍收縮，菌絲直徑 6~12 μm（圖3）。研究標本：湖南：長沙市岳麓山， 2022年7月9日，程紅（HMJAU 67725）。海南：樂東黎族自治縣尖峰嶺國家森林公園，2021年6月30日，圖力古爾、朱力揚（HMJAU 67724，模式）。討論：該種隸屬于較小蘑菇組Sect. Minores，其顯著特征為子實體較小，菌蓋具土棕褐色（RAL 8003）、紅棕色（RAL 8012）、巧克力棕色（RAL 8017）纖維質鱗片，菌柄基部膨大，具純白色（RAL 9010）假根，緣生囊狀體長球莖狀、近球形或寬棒狀。棕毛蘑菇與茶橙色蘑菇A. fulvoaurantiacus Linda J. Chen & Karun.、橙絨毛蘑菇A. luteofibrillosus M.Q. He， Linda J. Chen & R.L. Zhao和紅棕蘑菇A. rufifibrillosus M.Q. He & R.L. Zhao特征相似，在多基因系統發育樹中構成了1個較大分支，并具有較好的支持率（BS/PP=86/0.82）。然而，茶橙色蘑菇菌蓋和菌柄表面具亮黃色鱗片，菌環大，呈幕狀，緣生囊狀體梨形，寬棒狀或球形（9~13 × 12~30 μm）；橙絨毛蘑菇菌蓋和菌柄表面具亮黃色鱗片，菌環兩面光滑，擔孢子平均值Q較大（Qv = 1.72 ± 0.01），緣生囊狀體有時呈鏈狀（5~9 × 8~11 μm），群生或叢生；紅棕蘑菇菌蓋較大（直徑5.7~7.0 cm），具棕色或橙棕色鱗片，緣生囊狀體缺失，群生。以上形態特征均可與棕毛蘑菇區分開。在多基因系統發育樹中，棕毛蘑菇的2份標本與A. sp. ZRL2010079聚在一起，并獲得了較高的支持率（BS/PP=100/1），二者的分歧較小。A. sp. ZRL2010079由He等發現，僅有1份分子信息記錄，這提示新種棕毛蘑菇可能具有更廣泛的分布，A. sp. ZRL2010079可能是新種的另1個序列樣本。研究表明棕毛蘑菇A. brunneopilosus隸屬于蘑菇屬Agaricus 較小蘑菇亞屬Subg. Minores 較小蘑菇組Sect. Minores。較小蘑菇亞屬Subg. Minores由Zhao 等于2016年提出，目前該亞屬包括3個組：Sect. Leucocarpi Linda J. Chen & Callac、Sect. Minores （Fr.） Henn.和 Sect. Pantropicales L.A. Parra， Angelini， B. Ortiz， Linda J. Chen & Callac。其中較小蘑菇組的特征包括擔子體通常細長，小到中等大小，菌蓋表面常在觸摸時變黃，菌肉常傷變黃色，具茴香或苦杏仁的氣味，菌環通常單層，緣生囊狀體棍棒狀、梨形，有時無， KOH溶液反應陽性，Sch?ffer反應常為陽性。目前，我國蘑菇屬較小蘑菇亞屬中已進行特征描述并有分子信息支持的物種共有18個，主要分布在我國南方，云南省有11個物種。本研究增加了該亞屬1個物種，分別在海南和湖南發現。此外，系統發育樹中還有部分來自我國的待定物種Agaricus sp.，這些物種尚未被正式研究和發表，這表明我國仍有大量未被發現的新物種有待進一步研究。引用本文： 王世恩，圖力古爾.蘑菇屬較小蘑菇亞屬1新種［J］.菌物研究，2025，23（4）：274-281. (WANG Shi’en,BAU Tolgor.A New Species of Agaricus subgenus Minores （Agaricaceae， Agaricales） Discovered from China[J].Journal of Fungal Research,2025,23(04):274-281.) 作者簡介：王世恩，男，在讀碩士，主要從事大型真菌分類及資源應用。 通訊作者：圖力古爾，E-mail：junwusuo@126.com 文 字｜王世恩 初 審｜殷偉琦 復 審｜李艷雙 終 審｜鞠善宏
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