(6)專業虎杖抗乙肝、艾滋病毒

?虎杖提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙肝病毒產品的用途的制作方法

專利名稱：：虎杖提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙肝病毒產品的用途的制作方法

技術領域：

：本發明涉及醫藥和食品

技術領域：

，具體地說是涉及中藥提取物的用途，更具體地說是涉及中藥提取物虎杖提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品的用途，再具體地說是涉及中藥提取物虎杖提取物白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡稱化合物1)和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡稱化合物2)用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品的用途。

背景技術：

：(一)虎杖的研究概況虎杖為蓼科(Polygonaceae)蓼屬植物PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的根莖。多生于山谷、溪旁或岸邊，為多年生灌木狀草本，高達1米以上?；⒄仁寝た浦蟹浅Ｖ闹兴?。中醫認為，虎杖性味苦、平，具有祛風，利濕，破瘀，通經的功效；能治風濕，筋骨疼痛，濕熱黃疸，淋濁帶下，婦女經閉，產后惡露不下，瘡漏下血，跌撲損傷，燙傷，惡瘡癬疾等疾病?；⒄确植加诮K、浙江、江西、福建、山東、河南、陜西、湖北、云南、四川、貴州等中部及南部地區，春秋均可采挖。由于近年來人們發現虎杖具有良好的臨床應用，已逐漸成為新的研究熱點?；⒄戎兄饕卸揭蚁⑤祯?、黃酮類等化學成分，并具有廣泛的生理活性。發明人曾經對于虎杖的水溶性部位進行了系統研究，分離得到了一系列新的化學成分。新化合物包括帶硫酸酯基的二苯乙烯類化合物的鈉或鉀鹽。XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)，二苯乙烯苷類二聚體(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.ZhongD.WuH.WangZ.ZhangN.DimericstilbeneglycosidesfromPolygonumcuspidatum.Europ.J.Org.Chem.2002564-568)；苯丙素類成分.2000(XiaoK.XuanL.XuYBaiD.ZhongD.ConstituentsfromPolygonumcuspidatum.Chem.&Pharm.Bull.2002，50(5)605-608)。另外還包括一些已知的化合物等(肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的化學成分研究.中國藥學雜志.2003，38(1)12-14；肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的水溶性成分研究，中草藥.2003，34(6)496-498)。其中的化合物1(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-2″-sulfate)和化合物2(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-4′-sulfate)為從虎杖中分離得到的兩種二苯乙烯類化合物，是兩種天然化合物，其分子式皆為C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，其化學結構式如下化合物1化合物2M＝NaorK近代藥理學實驗表明虎杖具有較好的抗病毒活性，在體外對多種細菌及病毒有抑制和滅活作用。例如其對單純皰疹病毒、流感亞洲甲型京科68-1病毒及?？蒊I型等均有抑制作用(陰健，郭力弓.中藥現代研究與臨床(1)[M].北京學苑出版社.1993，434-439；NambaT，KurokawaM，KadotaS，ShirakiK.Developmentofantiviraltherapeuticagentsfromtraditionalmedicines.YakugakuZasshi，1998，118(9)383-400)，虎杖與黃芪聯用對單純皰疹病毒有很好的協同抑制作用(王志潔，程仲敏，方學韞.虎杖黃芪聯用抗I型皰疹病毒藥效分析.中國中藥雜志，1999，24(3)176-180.)?；⒄却继嵛锖退嵛矬w外顯示了較強的抗HBV的活性(ChangJS，LiuHW，WangKC，ChenMC，ChiangLCetal.EthanolextractofPolygonumcuspidatuminhibitshepatitisBvirusinastableHBV-producingcellline.AntiviralResearch，2005，6629-34.)。虎杖水提液在體外可以抑制HIV-1表面的gp120與細胞表面的CD4結合，抑制HIV-1感染MT-4細胞，而且對HIV-1的逆轉錄酶具有顯著的滅活作用(JiangY，SanoK，MolimatoS，etal.Anti-HIV-1activityofPolygonumcuspidatumextractinvitro.JapaneseArchivesofSexuallyTransmitteddiseases，1994，5(1)138-146.)；在體內虎杖水提液可以抑制LP-BM5病毒導致的艾滋病模型鼠的脾腫大、免疫抑制及病毒血癥等(蔣巖，王紅霞，鮑作義，等.用鼠艾滋病模型評價虎杖水提液的抗病毒作用.中國病毒學，1998，13(4)306-311.)。(二)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質，選用對活性成分溶解度大，對不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內溶解出來的方法。當溶劑加到中草藥原料(需適當粉碎)中時，溶劑由于擴散、滲透作用逐漸通過細胞壁透入到細胞內，溶解了可溶性物質，而造成細胞內外的濃度差，于是細胞內的濃溶液不斷向外擴散，溶劑又不斷進入藥材組織細胞中，如此多次往返，直至細胞內外溶液濃度達到動態平衡時，將此飽和溶液濾出，繼續多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質有關。溶劑可分為親水性有機溶劑及親脂性有機溶劑，被溶解物質也有親水性及親脂性的不同。有機化合物分子結構中親水性基團多，其極性大而疏于油；有的親水性基團少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質，同樣也與其分子結構有關。這樣，發明人就可以通過對中草藥成分結構分析，去估計它們的此類性質和選用的溶劑?？偟恼f來，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項性質相當，就會在其中有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規律。這是選擇適當溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據之一。(2)溶劑的選擇運用溶劑提取法的關鍵，是選擇適當的溶劑。溶劑選擇適當，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點①溶劑對有效成分溶解度大，對雜質溶解度??；②溶劑不能與中藥的成分起化學變化；③溶劑要經濟、易得、使用安全等。常見的提取溶劑可分為以下三類①水水是一種強的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質、氨基酸、蛋白質、有機酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。②親水性的有機溶劑也就是一般所說的與水能混溶的有機溶劑，如乙醇(又稱酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對中草藥細胞的穿透能力較強。親水性的成分除蛋白質、粘液質、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據被提取物質的性質，采用不同濃度的乙醇進行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時間短，溶解出的水溶性雜質也少。乙醇為有機溶劑，雖易燃，但毒性小，價格便宜，來源方便，有一定設備即可回收反復使用，而且乙醇的提取液不易發霉變質。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來最常用的方法之一。甲醇的性質和乙醇相似，沸點較低(64℃)，但有毒性，使用時應注意。③親脂性的有機溶劑也就是一般所說的與水不能混溶的有機溶劑，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強，不能或不容易提出親水性雜質。但這類溶劑揮發性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價格較貴，設備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時間反復提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時，直接應用這類溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續回流提取法等。同時，原料的粉碎度、提取時間、提取溫度、設備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡稱浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當的容器中，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發霉變質，須注意加入適當的防腐劑。②滲漉提取法(簡稱滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當溶劑滲進藥粉、溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴散能較好地進行，故浸出效果優于浸漬法。但應控制流速，在滲渡過程中隨時自藥面上補充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止。或當滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當于原藥材重的10倍時，便可認為基本上已提取完全。在大量生產中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。③煎煮提取法(簡稱煎煮法)煎煮法是中國最早使用的傳統的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設備的藥廠，多采用大反應鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數個煎煮器通過管道互相連接，進行連續煎浸。④加熱回流提取法應用有機溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發損失。小量操作時，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內裝藥材約為容量的20％～60％，溶劑浸過藥材表面約1～2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3～6小時，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產中多采用連續提取法。⑤連續回流提取法應用揮發性有機溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實驗或大型生產，均以連續提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實驗室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續提取法，一般需數小時才能提取完全。提取成分受熱時間較長，遇熱不穩定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進一步除去雜質，分離并進行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學成分，在不同極性溶劑中的溶解度進行分離純化，是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數的不同而達到分離的方法。萃取時如果各成分在溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過，一般有機溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因為能使較多的親水性雜質伴隨而出，對有效成分進一步精制影響很大。②逆流連續萃取法是一種連續的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數根或更多的萃取管。管內用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應或沉淀反應進行檢查。③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經多次移位萃取分配而達到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎上改進的溶劑萃取法。對溶劑系統的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內分離成，并可生成有效的液滴。由于移動相形成液滴，在細的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進溶質在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂是20世紀60年代發展起來的一類有機高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來逐漸被應用于中草藥化學成分的提取分離和中藥新藥的開發研制。大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結果。篩選原理是由于其本身多孔性結構所決定。由于吸附和篩選原理，有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定的溶劑洗脫而分開。這使得有機化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡化。大孔吸附樹脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹脂的極性發生改變，按照樹脂的表面性質，吸附樹脂一般分為非極性、中極性和極性三類。非極性吸附樹脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂，如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附樹脂。中極性吸附樹脂指含酯基的吸附樹脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹脂的基礎上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國國內經常使用的AB-8大孔吸附樹脂。極性吸附樹脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹脂。此外，有時把含氮、氧、硫等配體基團的離子交換樹脂稱作強極性吸附樹脂，強極性吸附樹脂與離子交換樹脂的界限很難區別。極性大孔吸附樹脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的DiaionHP2MG、美國Rohm-hass公司的XAD-10，XAD-9大孔吸附樹脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹脂具有很多的優點，如對某種物質的吸附選擇性較高；物理化學穩定性和機械強度較好；品種規格較多，可根據需要改變樹脂物理或化學結構；吸附樹脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應用于化工、醫藥等領域，近年來關于大孔吸附樹脂在天然產物提取分離中的應用研究報道越來越多。大孔吸附樹脂對中草藥化學成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對糖的吸附能力很差，對色素的吸附能力較強。(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡鹽沉淀，故可利用這種性質使有效成分與雜質分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質分離。常用作鹽析的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質，達到分離的方法。反之也可將大分子的雜質留在半透膜內，而將小分子的物質通過半透膜進入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結晶、重結晶和分步結晶法鑒定中草藥化學成分，研究其化學結構，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質本身性質是液體的化合物，可分別用分餾法或層析法進行分離精制。一般地說，中草藥化學成分在常溫下多半是固體的物質，都具有結晶體的通性，可以根據溶解度的不同用結晶法來達到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關，在真空狀態下，水的沸點降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下營養成分如維生素等的破壞，同時提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業有廣泛的應用，中國也開發和引進了各種真空干燥設備，其結構形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統的真空干燥裝置主要采用熱風，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導、對流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內相對缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優點，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設備成本、干燥費用也相對較低。(2)噴霧干燥是流化技術用于液態物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產品質量好，保持原來的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來制備微囊的研究正在進行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經離心噴霧器將其噴入熱氣流中，所得的產品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報道了一種噴霧通氣凍干新技術，是利用冷的空氣或氮氣作為介質，迅速流經凍結物使水升華，噴霧凍干制得的產品微粒小、干燥快、時間短、均勻、流動性好，并具良好的速溶性。近年來，對膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進展，流態化技術、噴射技術、惰性載體技術，則是在此研究基礎上發展起來的。旋轉閃蒸干燥機、熱噴射氣流干燥機、惰性載體干燥機均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產，將大大改善中藥加工的技術水平，提高生產效率。(4)遠紅外加熱干燥法是一項新的干燥技術，其干燥原理是將電能轉變為遠紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產生共振，引起分子和原子的振動和轉動，導致物體變熱，經過熱擴散、蒸發和化學變化，最終達到干燥的目的。遠紅外干燥可節省電能20％～50％，效果較好。(5)微波干燥法是一項20世紀60年代迅速發展起來的新技術，微波干燥實際上是通過感應加熱和介質加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉變為熱量從而達到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國生產的微波加熱成套設備有915mhz和2450mhz兩個頻率。(三)艾滋病和乙型肝炎的研究概況1、概述病毒感染性疾病特別是艾滋病和乙型肝炎嚴重威脅人類健康和生命。目前艾滋病在全球流行日益猖獗，聯合國艾滋病聯合規劃署公布，截止到2005年底全球艾滋病毒(humanimmunodeficiencyvirus，簡稱HIV)感染者達6500萬以上(①WHOhttp://www./en/KnowledgeCentre/HIVData/GlobalReport/Default.asp；②劉佳，高峰，魯鳳民，莊輝.HIV/AIDS全球流行現狀.傳染病信息.2006，19(5)228-232.)。艾滋病在亞洲也正以驚人速度蔓延，中國艾滋病流行情況也非常嚴重，目前有感染者約100萬，且每年以30％的速度增長，估計到2010年將達到1000萬，相當于整個比利時的人口(①傅繼華.艾滋病流行現況及面臨的問題與挑戰.預防醫學論壇.2007，13(3)I0001-I0002，②PortsmouthS，StebbingJ，KeyiX，JianpingZ，GuohuaP.HIVandAIDSinthePeople′sRepublicofChinaacollaborativereview.IntJSTDAIDS，2003，14(11)757-61.)。乙型肝炎是影響人類健康的主要疾病之一。全世界感染過HBV的人數大約超過20億，目前有3.5億慢性乙肝患者(參見①Fung，S.K.Luk，A.S.Viralhepatitis.Curr.Opin.Gastroenterol.2003，20241-247，②McMahonBJ.EpidemiologyandnaturalhistoryofhepatitisB.SeminLiverDis，2005，25(Suppl1)3-8)。中國則是病毒性肝炎發病率較高的國家，七億多人感染過乙肝病毒，總感染率達57％，共有一億多人攜帶乙肝病毒，現有慢性乙肝患者三千萬人以上，并且每年急性乙肝新發病例多達三百萬例。所謂的“無癥狀帶毒者”中60％～70％肝活檢病理報告為慢性遷延性肝炎或慢性活動性肝炎，長期的乙肝病毒感染將導致肝硬化、部分發展成肝癌，是主要死因之一(畢勝利.針對問題深入研究中國的病毒性肝炎.中華實驗和臨床病毒學雜志，2002，16(1)5-6.)。2、抗病毒藥物自艾滋病流行以來，抗病毒藥物的研究與開發進入了快速發展時期，新的藥物不斷面市。主要有以下幾種核苷類藥物，如阿昔洛韋(acyclovir)，羥甲基無環鳥苷(更昔洛韋，ganciclovir)，拉米夫定(lamivudine)等；非核苷類藥物，利巴韋林(vibarvirin)和金剛烷胺(amantadine)；其他類藥物如α-干擾素等(α-interferon)。上述幾類藥物可以部分緩解癥狀，延長生存期，但也有明顯的缺點。即它們大都具有嚴重的毒副反應，且由于病毒很容易變異，故很快會出現耐藥性；由于嚴重的毒副反應，患者治療依從性差，不能堅持，進一步促進耐藥性的產生；藥品價格昂貴；它們大都是對活躍復制的病毒有效，而不能清除潛伏狀態或非復制期病毒，且停藥后易復發。這使得它們的應用受到極大限制(參見①陶佩珍.抗艾滋病病毒藥物研究進展.中國新藥雜志，2002，11(11)842-846，②GulickRM.Newantiretroviraldrugs.ClinMicrobiolInfect，2003，9(3)186-193，③LaurenceJ.HIVtherapeuticsinchildrenandadultsandtheirsideeffects.AIDSRead，2004，14(1)6-7，④BourinbaiarAS，JirathitikalV.Low-costanti-HIVcompoundspotentialapplicationforAIDStherapyindevelopingcountries.CurrPharmDes，2003，9(18)1419-1431，⑤ThomasC，NelsonM，StebbingJ.HIVandHepatitisBAReview.AIDSPatientCareandSTDs.2003，17(12)623-633.)。3、體外抗艾滋病毒模型采用化合物對HIV誘導宿主細胞形成合胞體的抑制實驗。HIV在體內外均能感染人T淋巴細胞、單核巨噬細胞和神經細胞。一般來說，細胞水平的方法可用于篩選和研究抑制病毒復制周期中任一靶點的化合物?；衔飳IV誘導宿主細胞形成合胞體的抑制實驗就是一個常用來篩選抗HIV活性的細胞模型。我們體外抗艾滋病毒實驗采用人T淋巴細胞系C8166。HIV感染C8166細胞產生大的合胞體細胞和膨脹化效應，4～6d內導致細胞死亡。利用MTT法測試藥物對于對HIV-1IIIB致細胞病變(CPE)的抑制活性，確定其對C8166細胞存活和增殖的影響。在倒置顯微鏡下觀察和計數含有不同稀釋濃度的化合物和不含待測化合物培養孔中的合胞體細胞數，計算出抑制率和EC50(鄭永唐.抗HIV藥物的體外篩選和研究方法.中國新藥雜志，2002，11(8)596-600.)。4、體內抗艾滋病毒模型包括靈長類和非靈長類動物模型。靈長類包括人免疫缺陷病毒I型(黑猩猩)、II型(狒狒)、猴免疫缺陷病毒(簡稱SIV)等模型。非靈長類動物這類動物模型屬于逆轉錄病毒慢病毒感染所致。其中研究最多的是感染并使有蹄動物致病的病毒綿羊肺腺瘤-脫髓鞘性腦白質炎病毒(簡稱MVV)、山羊關節-腦炎病毒(簡稱CAEV)、馬傳染性貧血病毒(簡稱EIAV)和新發現的牛免疫缺陷病毒(簡稱BIV)(參見楊傳波，徐興然，蔡家利.人類艾滋病動物模型研究進展.動物醫學進展.2005，26(3)46-50.)。5、抗乙型肝炎病毒細胞模型選用HBV轉基因細胞株HepG2-2.2.15細胞為實驗的模型。由于缺乏更好的細胞和動物模型，能在體外長期培養的肝源性腫瘤細胞株HepG2-2.2.15是目前用于體外篩選抗HBV藥物的主要細胞模型。HepG2-2.2.15細胞是將含有HBV基因組(2個HBV頭對尾二聚體以尾對尾方向串聯)的重組載體質粒轉染HepG-2細胞，經G418篩選，得到的克隆能穩定分泌HBsAg、HBeAg、HBcAg及Dane顆粒，并可檢測到細胞內DNA和RNA等各種中間復制體，還能分泌前s1和前S2。該細胞株能夠穩定復制HBV病毒顆粒，是一個非常成熟的體外模型，廣泛被用于抗HBV藥物的體外篩選與評價。(參見①SellMA，ChenML，AcsG.ProductionofhepatitisBvirusparticlesinHepG2cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1987，84，1005-1009；②SellsMA，ZelentAZ，ShvartsmanM，AcsG.ReplicativeintermediatesofhepatitisBvirusinHepG2cellsthatproduceinfectiousvirions.J.Virol.1988，622836-2844；③LamperticoP，MaherJS，GerberMA.Developmentandapplicationofaninvitromodelforscreeninganti-hepatitisBvirustherapeutics.Hepatology，1991，13422-426.)。6、抗乙型肝炎病毒體內模型應用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉基因鼠模型。NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉基因鼠模型是一個應用較為廣泛的乙型肝炎病毒(HBV)動物模型(LarkinJ，ClaytonM，SunB，PerchonockCE，etal.HepatitisBvirustransgenicmousemodelofchronicliverdisease.Nat.Med.1999，5907-912；MorrisseyDV，LockridgeJA，ShawL，BlanchardK，etal.Potentandpersistentinvivoanti-HBVactivityofchemicallymodifiedsiRNAs.Nat.Biotechnol.23(8)1002-1007.)。該模型是將HBV載體尾靜脈高壓注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠，該鼠是免疫缺陷小鼠，缺乏成熟的T細胞和B細胞，并且自然殺傷細胞的活性也大部分缺失。全長HBV基因的頭尾二聚體pWTD被用作HBV的載體尾靜脈高壓注射入。這種HBV轉基因鼠伴有單核細胞侵潤的肝炎可以模擬人類的肝炎，可以用于研究導致乙肝發病的免疫成分和病毒的抗原靶標。因此結合中國的傳統中草藥，從中發掘有效、低毒、價廉的抗病毒藥物特別是抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒藥物，具有非常重要的意義。經文獻檢索等，到目前為止，尚未發現有此兩種化合物在用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病毒和乙型肝炎病毒及其直接相關疾病方面的報道。

發明內容本發明所需要解決的技術問題是公開了一種中藥虎杖提取物抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的作用，即該提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品的活性成分化合物1和化合物2，以克服現有技術存在的上述缺陷。也就是說，本發明通過細胞和動物實驗等研究，意在明確一種虎杖提取物在抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒應用方面的活性，即本發明涉及一種虎杖提取物的新用途。所述的虎杖提取物是指白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡稱化合物1)和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡稱化合物2)?；⒄忍崛∥镏械幕衔?和化合物2均是抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的活性成分，其使用方式是包括分別單獨使用、兩者合并使用或與其他化學物質聯合使用等中的一種，優選分別單獨使用，均能夠用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品是指用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品中的一種或多種；所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一種，優選HIV-1型艾滋病。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品均是包括醫藥和食品等領域產品中的一種，是包括藥物、試劑或食品等中的一種或多種，優選藥物。(一)技術構思自主開發創新藥物是中國目前的一項緊迫任務，中國中醫藥學具有悠久的歷史，用中草藥預防和治療疾病方面也積累了豐富的經驗，因此從中藥中尋找有效的活性成分或發現其新的用途均是有效的快捷途徑，也是中國創新藥物研制的優勢之所在。發明人通過對單味虎杖藥材的提取物進行系統的化學成分研究，篩選并證明該提取物的活性和用途。發明人從而推測虎杖的在預防、診斷、保護和治療艾滋病和乙型肝炎等方面活性的臨床藥效，也應主要是通過活性部位虎杖提取物特別是化合物1和化合物2的藥效來發揮的，研究結果也證明和證實了虎杖提取物特別是化合物1和化合物2具有顯著的藥理活性。艾滋病和乙型肝炎嚴重影響中國人口的健康，研制治療艾滋病和乙型肝炎藥物，尤其是預防、診斷、保護和治療艾滋病和乙型肝炎等方面產品特別是藥物具有顯著的社會效益、經濟效益。(二)虎杖提取物的藥理活性本發明對虎杖提取物在預防、診斷、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎等方面的活性進行了多方面的試驗。供試樣品均是采取常規的制備方法獲得，所得到的虎杖粗提物中的化合物1含量一般＜50％、化合物2含量一般＜60％，但是通過對虎杖粗提物進行純化，能夠得到純化后的虎杖提取物，其中的化合物1和化合物2的純度均能夠在95％以上，即本發明所定義的虎杖提取物。也就是說，采用虎杖提取物的主要成分化合物1和化合物2為原料，或者是直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖藥材為原料，或者直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖粗提物為原料，都能夠直接或間接用于制備抗抑郁產品?；⒄忍崛∥飪炦x以基本純的形式使用，如化合物1和化合物2的純度均≥95％。虎杖提取物艾滋病和乙型肝炎預防、診斷、保護和治療活性的體外試驗1、化合物1和化合物2的抗HIV活性體外抗艾滋病毒實驗采用人T淋巴細胞系C8166。利用MTT法測試藥物對于對HIV-1IIIB致細胞病變(簡稱CPE)的抑制活性，結果表明，化合物1對HIV誘導C8166細胞形成合胞體有明顯的抑制活性，對艾滋病毒具有顯著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50為153.42μg/mL，治療指數為＞13.04(見表1和表2)。并且該化合物水溶性很好，細胞毒性很低或者說無毒可以作為治療艾滋病的先導化合物。表1、化合物1和化合物2對C8166細胞的毒性作用表2、化合物1和化合物2對HIV-1IIIB誘導C8166細胞病變的抑制作用2、化合物1和化合物2的體外抗HBV活性體外抗乙型肝炎病毒試驗選用HBV轉基因細胞株HepG2-2.2.15細胞為實驗的模型。該細胞株能夠穩定復制HBV病毒顆粒，廣泛被用于抗HBV藥物的體外篩選。實驗結果表明(見表3、表4)化合物1和化合物2均對HBVDNA的復制具有顯著抑制活性，化合物1和化合物2還能夠明顯抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。進一步研究表明該作用具有一定的劑效關系。并且發現該化合物在實驗濃度下，對細胞的生長無明顯的毒性。表3、化合物不同濃度對HepG2-2.2.15細胞中HBVDNA拷貝數(log10copies/mL)影響*P＜0.05，與DMSO組比較；**P＜0.01，與DMSO組比較；***P＜0.001，與DMSO組比較。表4、化合物不同濃度對HepG2-2.2.15細胞中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，與DMSO組比較；**P＜0.01，與DMSO組比較；***P＜0.001，與DMSO組比較。3、化合物1和化合物2的體內抗HBV活性體內抗乙型肝炎病毒(簡稱HBV)活性應用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉基因鼠模型。研究發現，化合物1和化合物2可以顯著降低模型鼠體內HBVDNA的拷貝數(見表5)，降低血清中HbsAg的水平(見表6)。研究還發現，化合物1和化合物2在轉基因小鼠體內的抗HBV活性呈現一定的的劑效關系(見表7和表8)。表5、化合物對轉基因鼠中HBVDNA拷貝數(log10copies/mL)的影響*P＜0.05，在相同時段里，與PBS組比較；**P＜0.01在相同時段里，與PBS組比較。表6、化合物對轉基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，在相同時段里，與PBS組比較；**P＜0.01，在相同時段里，與PBS組比較。表7、化合物不同劑量對轉基因鼠中HBVDNA拷貝數(log10copies/mL)的影響*P＜0.05，與PBS組比較；**P＜0.01，與PBS組比較；***P＜0.001，與PBS組比較。表8、化合物不同劑量對轉基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，與PBS組比較；**P＜0.01與PBS組比較；***P＜0.001，與PBS組比較。(三)虎杖提取物的提取方法本發明以中國江蘇所產的虎杖為原料，采用溶劑提取和多種層析方法，分離得到此兩種天然化合物。采用紫外光普、紅外光譜、質譜、核磁共振氫譜和碳譜等方法，確定了該兩種化合物的結構為白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽。本發明所述的虎杖提取物特別是化合物1和化合物2能夠通過下述方法制備得到本發明所說的虎杖提取物的制備方法包括如下步驟(1)提取取虎杖原料若干，提取，得提取液，即虎杖粗提物；(2)分離純化將該粗提物分離純化，即得虎杖提取物。所述的提取方法包括溶劑提取法等本領域公知的所有可以使用的方法。上文所述的溶劑提取法的提取方法是本領域的常規提取方法，也就是說包括常用的超聲提取法、浸漬提取法、滲漉提取法、煎煮提取法、加熱回流提取法或連續回流提取法等中的一種或多種，優選加熱回流提取法或滲漉提取法；提取次數可以是一次或者是多次。同時，原料的粉碎度、提取時間、提取溫度、設備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。各種提取方法包括技術細節在內的所有技術資料，均可以參見有關的教材和相關的技術文獻等。上文所述的溶劑提取法所使用的提取溶劑是本領域的常規提取溶劑，也就是說包括常見的水、親水性的有機溶劑或親脂性的有機溶劑等三類提取溶劑的一種或多種；所述的水是包括水、酸水或堿水等中的一種；所述的親水性的有機溶劑是一般所說的與水能混溶的有機溶劑，包括乙醇、乙醇水溶液、甲醇或丙酮等中的一種或多種，優選乙醇或不同濃度的乙醇水溶液等中的一種或多種，進一步優選不同濃度的乙醇水溶液；所述的親脂性的有機溶劑是一般所說的與水不能混溶的有機溶劑，包括石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一種或多種，優選石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一種或多種，進一步優選氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等中的一種或多種。上述提取方法所得到的虎杖粗提物，需進一步分離純化。所述的分離純化方法是本領域公知的所有可以使用的方法，包括溶劑分離法，溶劑萃取法(包括萃取法、逆流連續萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一種或多種)，大孔吸附樹脂法，沉淀法，鹽析法，柱層析法或結晶與重結晶和分步結晶法等中的一種或多種；這些方法均是本領域的公知技術，在需要進一步確證的時候，很容易從有關的教材和相關的技術文獻等查閱到包括技術細節在內的所有技術資料。為了使產品性質穩定，便于使用和保存，還可增加一個優化的步驟，即步驟三(3)干燥。所述的干燥方法是本領域公知的可以使用的方法，包括常壓干燥法如經烘箱烘干、減壓干燥法、真空干燥法、噴霧干燥法、冷凍干燥法、遠紅外加熱干燥法或微波干燥法等中的一種或多種。在具體實施時，需要根據現有的資金、技術和有關的要求，采用其中合適的方法，并選取合適的條件等必要的措施以達到預期的目標。而這些方法也均是本領域的公知技術，在需要進一步確證的時候，都是很容易從有關的教材和相關的技術文獻等查閱到包括技術細節在內的所有技術資料。(四)虎杖提取物的用途1、概述本發明的目的是提供一種用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品，包括藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優選藥物。通過藥理活性篩選證明，虎杖提取物為其預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的活性部位。經實驗研究表明，虎杖提取物體外能夠抑制艾滋病病毒和乙型肝炎病毒，能夠顯著抑制小鼠體內的乙型肝炎病毒。已完成的急性毒性實驗證明，小鼠灌胃給藥對該活性部位的最大耐受量超過1.0g/kg，相當于臨床推薦用藥劑量的200倍以上，表明該有效部位安全可靠，解決了中藥復方中成分復雜、有效成分含量低且含有有毒成分的問題。綜上所述，發明人對虎杖提取物進行了理論探索，經過大量的實驗研究特別是長期的藥理學試驗，發現所述及的虎杖提取物有顯著的預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的活性。因此，虎杖提取物及其組合物可用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品，優選以本發明虎杖提取物為原料制備而成的藥物。2、虎杖提取物及其組合物的使用方法與要求本發明虎杖提取物可以單獨或與其它活性組分聯合使用，包括用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品，包括藥物、試劑或食品等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發明所述的虎杖提取物能夠單獨使用，還能夠與其他許多化學物質一起使用。無論這些化學物質是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協同放大作用、拮抗或緩解虎杖提取物的副作用等，這些化學物質是包括醫藥學上可接受的載體、食品、天然產物、化學合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優選包括醫藥學上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進一步優選醫藥學上可接受的載體。本文使用的“醫藥學上可接受的載體”包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫藥學上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫藥學上可接受載體還可以包含少量的輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們增強了該虎杖提取物的有效期或效力。從具體的分類上看，所說的醫藥學上可接受的載體是指醫藥學領域常規的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調節劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；吸收促進劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。例如，將活性組分虎杖提取物溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調節劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、聚維酮、聚乙二醇40蓖麻油或普郎尼克F-68等中的一種或多種)、穩定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，鹽酸普魯卡因或利多卡因等中的一種或多種)等。本發明所述及的虎杖提取物還可以以組合物的形式聯合使用，特別是與用其它化學物質如藥物對動物尤其是哺乳動物包括人或其他動物進行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進一步優選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發明虎杖提取物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發明虎杖提取物和藥學上可接受的載體。虎杖提取物的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的虎杖提取物為活性成分，以及一種或多種醫藥學上可接受的載體?；⒄忍崛∥锏乃幬锝M合物可以采用本領域公知的常規生產方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進行艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的預防、診斷、檢測、保護、治療或科學研究。藥物組合物優選含有重量比為0.5％～99％的活性成分虎杖提取物，進一步優選含有重量比為1％～95％的活性成分虎杖提取物，最優選含有重量比為5％～90％的活性成分虎杖提取物?；⒄忍崛∥锏乃幬锝M合物一般必須無菌且在生產儲存條件下穩定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質體或其它適合于高藥物濃度的有序結構。通過將所需量的該虎杖提取物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當的溶劑中并接著進行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該虎杖提取物加入含有基本分散介質和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當流動性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達到注射組合物的延長吸收。用于患者時，本發明所述的虎杖提取物劑量為5～20mg/kg·d，該劑量或用量通常根據患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。本發明虎杖提取物及其藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預防有效量”的本發明虎杖提取物。“治療有效量”是指在必要的劑量和時間下有效達到所需治療效果的量。虎杖提取物的治療有效量可以根據諸如個體的病況、年齡、性別和體重以及該虎杖提取物在該個體引起所需反應的能力等因素而變化。治療有效量亦指該虎杖提取物的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量?！邦A防有效量”是指在必要劑量和時間下有效達到所需預防效果的量。因為預防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預防有效量通常小于治療有效量。本發明虎杖提取物的治療或預防有效量的典型的非限制性范圍是5～20mg/kg，更優選為5～10mg/kg。應注意，劑量值將根據欲減輕的疾病類型和嚴重性變化，也就是說用于患者時，本發明所述的虎杖提取物劑量或用量，通常根據患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應理解，對于任何特定受治療者，應隨著時間根據個體需要和給與或監督給與所述組合物的人的專業判斷調整特定劑量制度，并且本文設定的劑量范圍僅為例證性的，并不會限制要求保護的組合物的范圍或實踐。也就是說，需要根據治療的對象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發明虎杖提取物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經靜脈給予哺乳動物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述虎杖提取物的單劑量約為50～400mg，優選約100mg，優選每日給藥1～3次?？梢哉{整劑量單位，以提拱最佳所需反應(例如，治療或預防應答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時間內給予幾個均分量或根據治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動物受治療者的單元劑量的物理分離單位；每個單位含有預定量的計算用于與所需藥用載體一同產生所需治療效果的活性物虎杖提取物。本發明的劑量單位形式的規格，由以下確定并直接取決于以下(a)該虎杖提取物的獨特特征和欲達到的特定治療或預防效果，和(b)在混合這種用于治療個體敏感性虎杖提取物的技術中的內在限制。3、虎杖提取物及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發明所述的虎杖提取物及其組合物制備的用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品，其中按照飲料、食品

技術領域：

的要求制備的產品能夠用于預防、保護和治療艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾?。话凑蔗t藥

技術領域：

的要求制備的產品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學物質進行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學物質與本節上文中所述的相同。在本發明中，所需物料包括本發明的原料、上述配套使用的化學物質等，均應根據實際情況和需要，采用食品級或藥用級的物料。本發明所述的虎杖提取物及其組合物，可以用本領域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術人員會理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結果而變化。在某些具體實施中，該活性化合物可以與保護該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統、透皮貼傳遞系統或微囊傳遞系統等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請專利或一般為本領域技術人員所知(例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinson編輯，MarcelDekker，Inc.紐約，1978)。本發明所述的虎杖提取物及其組合物，通常通過口服、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其制成常規的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實施時，本發明虎杖提取物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該虎杖提取物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關于口服治療給藥，可以將所述虎杖提取物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。為了以非腸道給藥之外給予本發明虎杖提取物，可能需要用防止其失活的材料對該虎杖提取物包衣或與該虎杖提取物一同給予。亦可以將補充的活性化合物加入該組合物中。在具體實施時，將本發明虎杖提取物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯合使用，可以優越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關的并發癥。制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿、酊劑或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。以上藥物或藥物組合物能夠使用各種途徑，在所述的使用形式中，優選的形式是口服制劑(如片劑、包衣片劑、膠囊、溶液或混懸液等中的一種或多種)、非腸道給予劑型(如注射劑、軟膏或貼劑等中的一種或多種)等中的一種或多種，進一步優選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優選片劑或注射劑中的一種。此外，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等在某些情況下也能夠單獨直接用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品，也能夠與許多化學物質進行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品。這里所述的化學物質與本節上文中所述的相同。例如，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末用于制備用于艾滋病和乙型肝炎預防、診斷、保護和治療產品特別是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的輔料用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品尤其是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品如藥物一起用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品如藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的輔助藥物一起用于制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品如藥物的各種劑型，如片劑、膠囊劑或混懸劑等中的一種或多種，優選膠囊劑。所述的方法之一是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末灌裝為膠囊劑，方法之二是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品如藥物一起灌裝為膠囊劑，方法之三是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的輔助藥物一起灌裝為膠囊劑；方法之四是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關的輔料一起按常規方法直接壓為片劑，方法之五是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關的制備用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品如藥物一起與有關的輔料按常規方法直接壓為片劑，方法之六是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關的輔助藥物一起與有關的輔料按常規方法直接壓為片劑等。除上述的六種基本方法外，還能夠選擇虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的其他形式或對虎杖提取物所使用的藥材原料進行本領域公知的方法處理后，制備各種劑型的含有虎杖提取物所使用的藥材原料的產品如藥物。但是，需要注意的是，在上述直接使用虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的時候，應先根據所使用的虎杖提取物的劑量要求，換算得到所需要使用的虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的用量。綜上所述，本發明虎杖提取物及其組合物可用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品，優選藥物和食品，進一步優選藥物。(四)技術特長本發明對以二苯乙烯苷為主要成分的虎杖提取物拓展了新的醫藥用途，也為預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病提供了一種新的藥物來源。本發明的虎杖提取物安全低毒，藥理作用較強，其原料來源豐富、價廉，制備工藝簡單，得率高，可用于制備預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品。本發明有針對性地研究虎杖提取物，虎杖提取物藥理作用較強，其使用安全，一物多用，最大限度地發揮了作用；虎杖提取物性質穩定，使用制備的制劑質量穩定，更適于抗艾滋病和乙型肝炎產品的工業化生產；預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的效果明顯，且使用范圍特別廣，因此容易推廣應用，能夠在較短的時間內產生巨大的社會效益和經濟效益?？傊?，本發明積極適應了現代醫療和科研領域的工作需要和人性化服務的需要，本發明為研究開發新的抗HIV和抗HBV產品提供了新的來源，對開發利用中國的藥用植物資源具有重要價值，是用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病等方面的安全原料。具體實施例方式本發明研究了現有的虎杖提取物的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備艾滋病和乙型肝炎預防、診斷、保護和治療等產品的原料，便于醫療行業和相關行業如食品、飲料等領域的安全使用。(一)虎杖提取物的制備方法為進一步闡述上述的虎杖提取物特別是化合物1和化合物2的提取方法，下面通過舉例來說明。例如，本發明所說虎杖提取物的制備方法可以為(1)提取按常規將虎杖藥材粉碎成粗粉，以10～95％乙醇滲漉提取，收集5～30倍藥材體積量滲漉液，即為提取液?；虬闯Ｒ帉⒎鬯榈幕⒄人幉挠?0～95％乙醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的4～8倍；或將粉碎的虎杖藥材用20～95％乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4～12倍；得提取液；將提取液過濾、濃縮，濃縮液離心或過濾；(2)分離純化提取液濃縮到濃度為0.5～10∶1(藥材重量∶溶液體積)，即為樣品液。將樣品液通過非極性或弱極性大孔樹脂吸附(非極性或弱極性大孔樹脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹脂等)或MCIgelCHP20P柱層析或SephadexLH-20柱層析，用水淋洗除去雜質；再用含水低級醇洗脫，低級醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～70％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集低級醇洗脫液，濃縮至合適體積；進一步用MCIgelCHP20P柱層析，用水淋洗除去雜質；再用含水低級醇洗脫，低級醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～70％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集10％～50％洗脫部位，濃縮至合適體積；再進一步用ToyopearlHW-40F柱層析，用水淋洗除去雜質；再用含水低級醇洗脫，低級醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～60％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集10％～30％洗脫部位，濃縮至合適體積，即為主要含有化合物1和化合物2的虎杖提取物；再進一步柱層析，能夠分別得到分離出的純化合物1和純化合物2。(二)虎杖提取物的鑒定方法本發明綜合應用質譜(簡稱MS)，核磁共振氫譜(簡稱1H-NMR)，核磁共振碳譜(簡稱13C-NMR)以及核磁共振二維譜(簡稱2D-NMR)等分析技術對虎杖提取物中的虎杖提取物中的化合物1和化合物2進行結構鑒定?；衔?具有如下理化性質分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色無定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-60°(c0.19MeOH)；紫外光譜UV(MeOH)λmax215，233(sh)，306，319nm；紅外光譜IR(KBr)vmax3406，1609，1539，1514，1447，1258，1173，1072，997cm-1；核磁共振氫譜(400MHz，CD3OD+D2O)δ7.03(1H，t，2.0，H-2)，6.71(1H，t，2.0，H-4)，6.85(1H，t，2.0，H-6)，7.57(2H，d，8.7，H-2′，6′)，7.00(2H，d，8.7，H-3′，5′)，7.04(1H，d，16.3，H-α)，7.23(1H，d，16.3，H-β)，5.25(1H，d，7.7，H-1″)，4.50(1H，dd，7.7，9.0，H-2″)，3.97(1H，dd，9.0，9.4，H-3″)，3.74(1H，dd，9.4，9.6，H-4″)，3.74(1H，m，H-5″)，4.14(1H，dd，11.2，1.8，H-6″-α)，3.94(1H，overlapped，H-6″-β)。核磁共振碳譜(100MHz，CD3OD+D2O)δ141.6(C-1)，107.9(C-2)，160.4(C-3)，104.7(C-4)，159.3(C-5)，108.9(C-6)，130.7(C-1′)，129.2(C-2′，6′)，116.8(C-3′，5′)，158.2(C-4′)，129.2(C-6′)，126.8(C-α)，130.3(C-β)，100.8(C-1″)，81.5(C-2″)，77.2(C-3″)，71.3(C-4″)，78.0(C-5″)，62.0(C-6″)。質譜FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(參見XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)?；衔?具有如下理化性質分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色無定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-70.6°(c0.08MeOH)；紫外光譜UV(MeOH)λmax211，229(sh)，301，312nm；紅外光譜IR(KBr)vmax3406，1597，1504，1444，1263，1165，1074，1047，871，843cm-1；核磁共振氫譜(400MHz，D2O)δ6.78(1H，t，2.1，H-2)，6.48(1H，t，2.1，H-4)，6.68(1H，t，2.1，H-6)，7.48(2H，d，8.7，H-2′，6′)，6.29(2H，d，8.7，H-3′，5′)，6.89(1H，d，16.4，H-α)，7.00(1H，d，16.4，H-β)，4.98(1H，d，7.6，H-1″)，3.56(overlapped)，3.63(1H，dd，9.2，8.7，H-3″)，3.51(1H，dd，8.7，9.4，H-4″)，3.59(1H，m，H-5″)，3.95(1H，dd，12.5，2.0，H-6″-α)，3.76(1H，12.5，5.7，H-6″-β)。核磁共振碳譜(100MHz，D2O)δ142.5(C-1)，109.2(C-2)，160.7(C-3)，106.1(C-4)，159.5(C-5)，110.9(C-6)，137.4(C-1′)，130.5(C-2′，6′)，124.4(C-3′，5′)，153.3(C-4′)，130.5(C-6′)，130.5(C-α)，131.1(C-β)，103.0(C-1″)，75.6(C-2″)，78.3(C-3″)，72.2(C-4″)，78.8(C-5″)，63.3(C-6″)。質譜FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(參見XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)。(三)常用的實用劑型本發明制備粉針劑一般采用常規的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖提取物，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖提取物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發明制備小針劑時，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含虎杖提取物10～100mg。本發明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規技術制備。在本發明中，以上所述的具體實施方式和以下所述的實例均是為了更好地闡述本發明，并不是用來限制發明的范圍。下面通過實施例對本發明作詳細描述。實施例1、抗艾滋病毒試驗C8166細胞模型測試藥品體外抗HIV-1活性的材料、方法與步驟(1)試劑HEPES、MTT、DMF、青霉素(Penicillin)、硫酸鏈霉素(Streptomycinsulfate)、谷氨酰胺(Glutamine)均購自Sigma公司；2-巰基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethanol)為Bio-Rad公司產品。RPMI-1640和新生小牛血清為Gibco公司產品。(2)培養基RPMI-1640完全培養基，含有10％新生小牛血清，2mML-谷氨酰胺，10mMHEPES，50μM2-巰基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml鏈霉素。(3)細胞和病毒人T淋巴細胞系C8166以及HIV-1實驗株HIV-1IIIB均由英國MedicalResearchCouncil，AIDSReagentProject惠贈。所有細胞和病毒均以含15％小牛血清的RPMI-1640完全培養基進行培養。按常規方法制備HIV-1IIIB，滴定并計算出病毒的TCID50。病毒貯存液分裝后，置-70℃保存。細胞和病毒按常規方法凍存和復蘇。(4)HIV-1感染性滴定HIV-1IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良進行滴定，簡述如下將HIV-1貯存液在96孔板上作4倍稀釋，10個梯度，每梯度6個重復孔，同時設置對照孔6孔。每孔加入C8166細胞50μl，每孔終體積為200μl。37.5℃CO2培養。第三天補加新鮮RPMI-1640完全培養基100μl，第七天在倒置顯微鏡下觀察每孔中HIV-1誘導的細胞病變效應(CPE)，以每孔是否有合胞體(Syncytium)的形成確定；按Reed&Muench方法計算病毒的TCID50(50％Tissuecultureinfectiondose)。(5)對C8166細胞的毒性實驗4×105/mlC8166細胞懸液100ul與不同的待測藥物溶液混合，設三個重復孔。同時設置不含藥物的對照孔，37.5℃CO2培養3天，采用MTT比色法檢測細胞毒性。ELx800酶標儀測定OD值，測定波長為595nm，參考波長為630nm。計算得到CC50值(50％Cytotoxicconcentration)，即對50％的正常T淋巴細胞系C8166產生毒性時的藥物濃度。(6)對HIV-1IIIB致細胞病變(CPE)的抑制實驗將8×105/mlC8166細胞50ul/孔接種到含有100μl/孔梯度倍比稀釋藥物的96孔細胞培養板上，然后加入50μl的HIV-1IIIB稀釋上清，1300TCID50/孔。設3個重復孔。同時設置不含藥物的正常細胞對照孔。AZT為陽性藥物對照。37.5℃CO2培養3天，倒置顯微鏡下(100×)計數合胞體的形成。EC50(50％Effectiveconcentration)為抑制合胞體形成50％時的藥物濃度。(7)計算公式根據實驗結果繪制劑量反應曲線，按Reed&Muench法計算出化合物抑制病毒的50％有效濃度(EC50)，50％抑制細胞生長濃度(CC50)及抗HIV-1活性的治療指數TI值(Therapeuticindex)為TI＝CC50/EC50。①細胞生長存活率(％)＝實驗孔OD值/對照孔OD值×100。②HIV-1致細胞病變的抑制率(％)＝(1-實驗孔合胞體數/對照孔合胞體數)×100實驗結果與結論化合物1對HIV誘導C8166細胞形成合胞體有明顯的抑制活性，對HIV具有顯著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50為153.42μg/mL，治療指數為＞13.04(見表1和表2)。并且該化合物水溶性很好，細胞毒性很低或者說無毒可以作為治療艾滋病的活性化合物。實施例2、體外抗乙型肝炎病毒試驗(1)材料與試劑細胞HBV-DNA克隆轉染人肝癌細胞的HepG2-2.2.15，由美國TheMountSinaiMedicalCenter于1987年構建。二甲亞砜(簡稱DMSO)、卡那霉素、MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)均購自美國Sigma公司；RPMI1640培養基和胎牛血清，美國Gibco公司產品；ELISAHBsAg檢測試劑盒Bio/Rad公司產品；病毒DNA水平用ABIPrism7000序列檢測儀(AppliedBiosystems)檢測。(2)試驗方法本實驗在體外培養的HepG2-2.2.15(2*106/ml)中加入不同濃度的待選藥物，藥物作用一周后，分別通過定量PCR和Elisa法檢測細胞HBVDNA的拷貝數和HBV表面抗原HBsAg的濃度，來初步篩選對HBV有抑制作用的藥物.本研究還觀察了待選藥物作用下HepG2-2.2.15的生長曲線，發現待選藥物在實驗濃度下，對細胞的生長無明顯的毒性。乙型肝炎病毒DNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根據說明書從50μL培養基提取。病毒DNA水平用ABIPrism7000序列檢測儀(AppliedBiosystems)檢測。定量實時PCR使用以下引物和探針序列正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探針FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全長HBV基因組的psHBV-1載體用來作為計算每mL培養基含有多少拷貝數的標準曲線。乙型肝炎表面抗原(簡稱HBsAg)酶聯免疫吸附測定法(簡稱ELISA)HbsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA檢測試劑盒檢測，未轉染HBV載體的細胞用來作為分析的背景。實驗結果與結論化合物1和化合物2對HBVDNA的復制具有顯著抑制活性，化合物1和化合物2還能夠明顯抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。進一步研究表明該作用具有一定的劑效關系(見表3、表4)。并且發現該化合物在實驗濃度下，對細胞的生長無明顯的毒性。實施例3、體內抗乙型肝炎病毒試驗(1)動物與試劑小鼠采用5-6周的NOD.CB17-Prkdcscid/J雌鼠(JacksonLaboratory)，每只20g左右。(2)試驗方法0.3μgpWTDHBV載體質粒通過尾靜脈高壓注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠(JacsonLaboratory)?；衔?和化合物2在尾靜脈高壓注射HBV質粒后第7天和第10天，分別腹腔注射1mg/kg或者10mg/kg的劑量。HBVDNA拷貝數用定量實時PCR測定，用log10copies/mL(±s.e.m.)表示。血清HBsAg水平用ELISA法分析，用ng/ml(±s.e.m.)表示(n＝5)?；衔?和化合物2劑效關系研究。HBVDNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根據說明書從50μL鼠血清中提取，HBVDNA水平用ABIPrism7000測序儀(AppliedBiosystems)測定。定量實時PCR用如下引物和探針來進行檢測正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探針FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全長HBV基因組的psHBV-1載體用來作為計算每mL血清含有多少拷貝數的標準曲線。乙型肝炎表面抗原酶聯免疫吸附測定法HBsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA檢測試劑盒根據說明書檢測，未轉染HBV載體的細胞用來作為分析的背景。實驗結果與結論化合物1和化合物2可以顯著降低模型鼠體內HBVDNA的拷貝數，降低血清中HbsAg的水平(見表5、表6)。研究還發現，化合物1和化合物2在轉基因小鼠體內的抗HBV活性呈現一定的的劑效關系(見表7、表8)。實施例4、虎杖提取物的制備購自上海市藥材公司的中藥虎杖10Kg，用60％的丙酮滲漉提取三遍，濃縮蒸去丙酮，沉淀，過濾，除掉大部分脂溶性物質。剩余部分經濃縮至適當體積后，再加水沉淀部分脂溶性物質，濃縮至小體積后，分次上MCIgelCHP20P柱層析，先用水洗脫以去除相當部分的糖，后用10-80％甲醇洗脫，再用80％-100％甲醇洗脫以除去大量的大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；50-80％甲醇洗脫部分上LH-20柱層析，先用水洗脫，然后用10-80％的甲醇梯度洗脫，30％的甲醇洗脫組分經過各種層析方法MCIgelCHP20P、LH-20、ODSC-18綜合應用，分離得到50mg所需的化合物1、70mg化合物2，經理化性質分析，波譜解析(主要是紫外光普、紅外光譜、質譜、核磁共振氫譜和碳譜)確定結構。實施例5、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實施例6、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物60g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。實施例7、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。實施例8、虎杖提取物粉針劑的制備(1)處方注射用虎杖提取物半成品150g甘露醇400g注射用水加至10000ml共制成10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量虎杖提取物，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1％針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35％。實施例9、虎杖提取物小針劑的制備取虎杖提取物5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。實施例10、虎杖提取物小針劑的制備取虎杖提取物10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。實施例11、虎杖提取物葡萄糖輸液的制備取虎杖提取物2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。實施例12、虎杖提取物葡萄糖輸液的制備取虎杖提取物2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。實施例13、虎杖提取物氯化鈉輸液的制備取虎杖提取物1g，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。實施例14、虎杖提取物片劑的制備(1)處方虎杖提取物1000.0g微晶纖維素1170.0g預膠化淀粉690.0g乳糖125.0g5％PVP無水乙醇適量硬脂酸鎂15.0g共制成10000片(2)制備工藝按以上處方分別稱取處方量的主藥與輔料，按等量遞加法混合均勻后照處方工藝項下進行制軟材、制顆粒，干燥，整粒等過程，計算好片重后用單沖壓片機和10.5mm淺凹沖模壓片，控制裸片硬度5～7kg，共制得片劑9698片，成品率為96.98％。采用滾轉噴霧法包衣，包衣工藝如下包衣液的配制胃溶薄膜衣料85G61235，由上?？房蛋录夹g有限公司提供包衣工藝將待包衣裸片(硬度5～7kg)放入包衣鍋中，啟動攪拌裝置和鼓風加熱裝置，待裸片溫度升至40℃時，開始打開噴槍對準片床的上1/3處噴入包衣液包衣，控制片床溫度38～42℃，氣磅壓力6kg，包衣液流速為50mL/min，包衣膜重占包衣片重的3％。實施例15、虎杖提取物片劑的制備取虎杖提取物100g，微晶纖維素80g、乳糖15g、預膠化淀粉60g，過篩，混合均勻，用適量10％PVP乙醇溶液制軟材，制粒，干燥，加入硬脂酸鎂3g，整粒，壓片，制成1000片。實施例16、虎杖提取物膠囊劑的制備(1)處方虎杖提取物1000.0g微晶纖維素1000g羧甲基淀粉鈉140g無水乙醇適量滑石粉80g共制成10000膠囊(2)制備工藝按以上處方分別取原料藥虎杖提取物及處方中其它輔料分別過100目篩，置60℃烘干，稱取處方量虎杖提取物與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉等量遞加法混合均勻，用適量無水乙醇制軟材，30目篩制粒，50～60℃干燥2小時，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉和羧甲基淀粉鈉混合均勻。權利要求1.虎杖提取物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用。2.虎杖提取物的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用。3.虎杖提取物的藥材原料在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用。4.根據權利要求3所述的虎杖提取物的藥材原料在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用，其特征在于，所述的虎杖提取物的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。5.虎杖提取物的藥材原料的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用。6.根據權利要求5所述的虎杖提取物的藥材原料的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品中的應用，其特征在于，所述的虎杖提取物的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。7.根據權利要求1～6任一項所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品是指用于預防、診斷、檢測、保護、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關疾病的產品中的一種。8.根據權利要求7所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一種。9.根據權利要求8所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，所述的艾滋病是HIV-1型艾滋病。10.根據權利要求7所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品是包括藥物、試劑或食品中的一種。11.根據權利要求10所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產品是藥物。12.根據權利要求1～6任一項所述的虎杖提取物的應用，其特征在于，該虎杖提取物是指①白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉，結構式如左其中，M＝Na或M＝K；和②鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽，結構式如下其中，M＝Na或M＝K。13.根據權利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的該虎杖提取物中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽的純度均≥95％。14.根據權利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的該虎杖提取物中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽的使用方式是包括分別單獨使用、兩者合并使用或與其他化學物質聯合使用中的一種。全文摘要本發明涉及虎杖提取物的用途。經體外抗艾滋病毒試驗顯示，其中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽在細胞模型及體內轉基因鼠模型上，顯示了顯著的抗乙型肝炎病毒的活性；白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽還對艾滋病毒具有顯著的抑制作用。病毒感染性疾病特別是艾滋病和乙型肝炎嚴重威脅人類健康和生命，乙型肝炎是影響人類健康的主要疾病之一，本發明為研究開發新的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒藥物提供了先導化合物，為臨床提供了一種新的藥物來源，對開發利用我國的藥用植物資源具有重要價值。