腺病毒(adenovirus ) 腺病毒顆粒沒有包膜的直徑為70~90nm的顆粒,由252個殼粒呈二十面體排列構成。每個殼粒的直徑為7~9nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子,約含35 000 bp,兩端各有長約100 bp的反向重復序列。 腺病毒的結構蛋白在細胞核內聚集形成病毒衣殼,病毒的基因組被包裝進去,形成有感染能力的病毒顆粒,并終裂解宿主細胞被釋放出去,完成腺病毒的生活周期。 特點: 1.腺病毒具有宿主范圍非常廣,能感染增殖和非增殖各種細胞,如肝細胞、血管內皮細胞等 2.腺病毒基因組較大(36kb)絕大多數基因組均能被外源基因取代,故插入大片段外源基因的潛力大。 3.不整合到染色體中,目的基因在宿主細胞基因組外游歷狀態下表達,無插入致突變性,對人致病性低; 4.是瞬時轉染,表達快速,容易將外源基因直接轉移到靶細胞中,有效表達成活性蛋白。 5.能自行復制,有效進行增殖,產生滴度高; 6.與人類基因同源; 7.能在同一細胞株或組織中設計表達多個基因。簡單的方法是將含有兩個基因的雙表達盒插入腺病毒轉移載體中,或者用不同的重組病毒共轉染目的細胞株來分別表達一個蛋白。 綜上腺病毒載體的特點,產生了其應用和意義: 1.應用于體內接種疫苗。用攜帶**調節基因或腫瘤特異抗原已近的腺病毒載體轉入相應腫瘤細胞以誘導抗腫瘤**反應,可制成具有抗腫瘤活性的瘤苗。 2.應用于信號轉導,基因轉位,Co-IP,動物實驗,干細胞研究等科研實驗。 3.可以完成較高難度的克隆構建,包括具有細胞毒性作用基因的腺病毒構建,在短時間內完成從原始質粒到病毒DNA的構建工作。 4.產生滴度高,非常適于基因**。例如:Rosenfeld等用構建的含肌糖原磷酸化酶cDNA的重組腺病毒感染肝細胞,糖原磷酸化酶活性增加46倍,提示可以對糖原蓄積**進行基因**。 |
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