流式圖最常用的是:直方圖、散點圖、等高線圖。
1. 直方圖(一個通道的信息) 流式直方圖形成的原理與統計學中的直方圖相似,是在統計學直方圖的基礎上進一步發展而成的。流式直方圖的x軸表示一個通道的值,y軸表示細胞數量。 流式直方圖雖不是如此簡單,但是基本原理是相同的。流式直方圖是在此統計直方圖的基礎上,使統計區間不斷地縮小,縮小到甚至可以認為一個值就是一個統計區間,使統計的細胞數量不斷地增加,增加到以萬計,甚至以十萬計時,相鄰的小統計區間內的細胞數相差不多,這時的直方圖好像是由光滑的曲線所圍成的。 2. 流式散點圖(同時顯示2個通道的信息) x軸表示一個通道的值,y軸表示另一個通道的值,圖中每一點代表一個細胞。 與流式直方圖相比,流式散點圖能夠同時表示兩個通道的值,能夠更加直觀地表示細胞的信息,所以流式散點圖更加直觀和常用。更易于細胞分群、分類,以及確定比例關系等。
一般在流式分析過程中,先利用FSC-SC物理圖根據細胞的大小和顆粒度將細胞進行分群,然后根據目標細胞處于哪個群體,再將該群體細胞設門(set gate),進一步分析該群體中的目標細胞。 門(gate)是流式分析過程中一個較為重要的概念,流式分析時有時不希望所有的樣品細胞都顯示于流式圖中,而是希望只顯示感興趣的細胞,排除其他非相關細胞的干擾,使顯示的信息更加直觀,更具有針對性。 流式細胞術散點圖參數FSC-A與FSC-H中的A是area的縮寫,H是height的縮寫。這是機器在記錄信號時所采用的參數(不顯示在用戶界面,在調試機器的時候可以顯示)。每個細胞通過激光的時候,機器都會記錄一個波狀信號(一個拱形的信號),H就是這個拱的高度(代表的是信號的強度),A就是這個拱的曲線下面積,代表信號強度和細胞大小的關系。其實還應該有一個參數W,是width的縮寫,是這個拱的寬度,代表細胞通過激光束所花的時間。散點圖通常用于顯示和比較數值。例如科學數據、統計數據和工程數據。當要在不考慮時間的情況下比較大量數據點時,請使用散點圖。散點圖中包含的數據越多,比較的效果就越好。氣泡圖要求每個數據點具有兩個值(探頂值和探底值)。對于處理值的分布和數據點的分簇,散點圖都很理想。如果數據集中包含非常多的點(例如,幾千個點),那么散點圖便是最佳圖表類型。在點狀圖中顯示多個序列看上去非常混亂,這種情況下,應避免使用點狀圖,而應考慮使用折線圖。 3. 流式等高線圖(同時顯示2個通道的信息) 流式等高線圖與流式散點圖相似,一張流式等高線圖也能同時顯示兩個通道的信息,所不同的是,它借助地理等高線圖的形式。地理等高線圖用封閉的環線代表海拔高度相同的地方,環線聚集越多,表示海拔高度變化越快,環線的中央區域表示海拔最高或者最低的區域。 流式等高線圖借助地理等高線圖表示細胞的密集程度,流式等高線圖的環線代表的是細胞密度相同的區域,所以,環線聚集越多的地方表示此區域細胞密度變化越快,細胞最稀疏的地方還是用散點表示,環線的中央區域代表細胞聚集的中心。 流式等高線圖的意義和實際應用與流式散點圖較為相似,可以看作是流式散點圖的一個變體。相比之下,流式散點圖更為直觀,所以應用也更為廣泛。 當然,流式等高線圖也有其自身的優點,它較能直觀地體現細胞群的集中點,等密度環線的中央區域代表一個細胞群的集中點,一般代表一個細胞群,所以在某些情況下,流式等高線圖比流式散點圖更能直觀地體現細胞的分群。 下圖顯示的是正常C57小鼠脾臟淋巴細胞分群的流式等高線圖。 |
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