|
FlowJo 是美國斯坦福大學 Leonard Herzenberg 實驗室研發的一款流式數據分析軟件，它可以對所有流式細胞儀產生的數據進行分析，在多種電腦操作系統上兼容性良好。 由于功能強大，簡單易用，已經被生命科學領域內的科學家、實驗室廣泛使用；同時 FlowJo 也是各高影響力核心期刊最受歡迎的流式數據分析軟件。 本文主要針對流式分析中常用的平均熒光強度 (MFI)，五個小步驟帶你快速分析出 MFI。 打開 FloJo，顯示工作臺。
找到原始數據（fcs 格式文件）
Ctrl+A 將所有文件全選，鼠標將其直接拖到 All Samples 中，如圖：
針對數據一進行分析 1、鼠標左鍵點擊 fcs 格式數據出現流式散點圖，X 軸默認選擇 SSC（側向散射，其散射強度與細胞內顆粒結構的質量正相關，即細胞內顆粒結構越復雜，質量越大，SSC 越大；反之越小）。 Y 軸默認選擇 FSC（前向散射，該值與細胞的直徑正相關，即細胞越大，FSC 越大；反之越小）。
2、圈門：根據實驗目的選擇合適的圈門工具（矩形門、十字門、橢圓門、多邊形門）進行圈門，圈出需要進行分析的細胞后點 OK 確認。圈出的細胞默認為 Lymphocytes（當然也可以根據自己的需要重命名），下方的比例代表這群細胞占總細胞的百分比。
3、對圈出細胞進行分析，雙擊 Lymphocytes 選中這群細胞，根據實驗目的、染料所需的熒光激發 / 發射波長選擇合適的橫縱坐標，完成后關閉處理界面回到軟件主界面。 我選取的橫坐標是 PE-A，縱坐標是 Histogram，點擊橫坐標邊上的 T 可將橫坐標數值改為 log 值，將其變為正值，得到下圖。
4、添加 MFI：選擇橫坐標下方的Σ Statistion，點擊下面的Σ+ 打開新界面，單擊左邊框的 Mean，選擇想要分析的 PE-A，點擊 Add 添加可以使其 MFI 在Σ Statistion 框中顯示。
對其他數據進行批處理中 鼠標拖拽已處理文件到 All Samples 中，即可實現對其他數據的批量處理，簡單高效。
數據導出 點 File 下方的 Save As 可導出到 Excel 表格，通過篩選等命令對數據快速處理，十分方便。
以上是本人對流式分析中常用到的 MFI 處理所了解的基本操作，希望對大家有所幫助。 |
|
|
