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專利名稱：用融合技術馴化栽培野生名貴食用菌臺蘑和銀盤蘑菇的方法 技術領域： 本發明是一種食用菌的馴化栽培方法，具體涉及一種用融合技術馴化栽培野生臺蘑和銀盤蘑菇的方法背景技術臺蘑和銀盤蘑菇是產于山西省著名佛教旅游勝地五臺山地區和新興生態旅游區管涔山的名貴野生食用菌的統稱，以其濃郁的香味和純天然高品質聞名于世，分布于海拔2000-2800米高度的山坡草地和落葉松及云杉林帶。主要生長在濕潤多雨的7-9月份，這兩類蘑菇多屬口蘑科，主要包括白樁菇(Leucopaxillus candidus)、大白樁菇(L.giganteus)、大杯傘(Clitocybe maxima)、肉色杯傘(C.geotropa)、香杯傘(C.odora)、粉紫香蘑(Lepista personata)、肉色香蘑(L.irina)、紫丁香蘑(L.nuda)、直柄銛囊蘑(Melanoleuca strictipes)、銛囊蘑(M.cognata)、條柄銛囊蘑(M.grammnopodia)以及蒙古口蘑(Tricholoma mongolicum)和楊樹口蘑(T.populinum)等10多種菌種。近年來，由于林區生態資源未進行很好的保養和營造，無人管理，再加上農民進行長期的無序采收，導致天然臺蘑和銀盤蘑菇產量低、質量差，菇圈嚴重縮小退化甚至消失。如果不及時進行人工選育和馴化栽培，幾年內，我省的這一珍貴的地方資源將會被破壞貽盡而消失。 長期以來人們對臺蘑和銀盤蘑菇的人工栽培也做了大量的工作，主要是從傳統的馴化方式和工作思路出發，而沒有突破性的進展。 發明內容 本發明解決了臺蘑和銀盤蘑菇這一野生名貴食用菌的馴化栽培的技術問題，提供了一種利用原生質體單雙核體非對稱融合技術馴化栽培臺蘑和銀盤蘑菇的方法。經馴化的臺蘑和銀盤蘑菇菌種可在室內進行菌絲體的大量培養后，在五臺山管涔山野外林區播種栽培，既保持了原有菌種的自然特性和風味，又可大面積人工栽培，大幅度提高了臺蘑和銀盤蘑菇的產量和質量。 本發明是通過下列方案實現的，一種用融合技術馴化栽培野生臺蘑和銀盤蘑菇的方法，其特征是以所馴化菌種臺蘑和銀盤蘑菇的雙核體原生質體作為供體，與具有所需優良特性菌種鳳尾菇(Pleurotussajor-caju)的單核體原生質體作為受體融合，從而選育出易于人工培養的所馴化的野生臺蘑和銀盤蘑菇菌株，主要步驟(1)收集受體菌株收集生長快、產量高、質量好的鳳尾菇子實體，收集擔孢子，進行單孢分離，UV處理孢子液，篩選營養缺陷型突變體作為受體菌株；(2)收集供體菌種采集分離臺磨和銀盤蘑菇的新鮮子實體，在無菌條件下進行組織分離得到純菌種雙核菌絲體作為供體菌株；(3)原生質體分離將受體菌種和供體菌種分別進行菌絲體培養和原生質體分離、純化，供體菌種的雙核體原生質體經過60℃、5分鐘的高溫滅活后與帶有遺傳標記的受體單核體原生質體融合；(4)受體的原生質體與供體滅活原生質體融合后，再生，通過選擇性培養基選出融合子再生菌株；(5)將再生菌株進一步培養、分離、篩選，得到恢復活性獲得新的生理和生態特性的供體菌株，從中選擇具有優良性的臺磨和銀盤蘑菇新菌株進行擴大培養，在實驗室進行母種培養、原種培養、栽培種培養，最后進行菌絲體的菌袋生產。 (6)將培養的菌絲體在適宜的季節播種在五臺山、管涔山適宜于臺磨和銀盤蘑菇生長的林區，當年8-10月份即可采集生長出的大量臺蘑和銀盤蘑菇子實體。 本發明選用產量高，生態條件要求粗放，易于栽培的食用菌鳳尾菇作為受體，而將馴化的臺磨和銀盤蘑菇的菌種作為供體進行原生質體的融合，使馴化的野生食用菌種的基本遺傳物質在受體菌株內得以表達，進行正常分裂，繁殖，經過幾代以后供體的雙核體重新分離出來，從而篩選出既保持了供體的基本遺傳特性而又獲得受體的一些優良特性的新菌株。也就是說獲得了一種既保持臺磨和銀盤蘑菇供體菌株子實體質量高、風味獨特等基本遺傳特性，又獲得了鳳尾菇受體菌種生長快、栽培條件粗放、溫度適應性廣、產量高的特性。 本發明所述的受體菌種選用鳳尾菇，進行馴化的供體菌種為五臺山和管涔山的名貴野生食用菌臺磨和銀盤蘑菇。 本發明所述的培養基1、完全培養基(CMA)硫酸鎂0.5克；磷酸二氫鉀0.46克；磷酸氫二鉀1.0克；蛋白胨2.0克；酵母膏2.0克；葡萄糖20克；HCI 0.005毫升；瓊脂20.0克；水1000毫升。 2、組織分離培養基CMA+2％馴化菌種產地土壤；3、基本培養基(MMA)硫酸鎂0.5克；磷酸二氫鉀0.46克；磷酸氫二鉀1.0克；天冬酰胺2.0克；葡萄糖20.0克；HCl 0.12毫升；水1000毫升。 4、滲透壓穩定完全培養基(OCMA)CMA+0.6mol/l硫酸鎂5、滲透壓穩定基本培養基(OMMA)MMA+0.6mol/l硫酸鎂6、菌袋栽培料(SWS)80％.雜木屑；16％夫皮；石膏粉2％；馴化菌種產地土壤2％；水65％。拌勻，裝入16×32厘米的聚丙烯袋，每袋裝濕料850克。121℃，高壓滅菌2小時。 本發明的優點及效果1、利用原生質體單雙核融合雜交的方法，從改變馴化栽培品種本身遺傳和生理生態特性的角度著手，可大大縮短馴化時間。利用這種方法可以有目的地改變野生菌種的生理特性和遺傳特性，增加其對生態條件的適應性，從而提高產量。 2、采用滅活雙核體原生質體作為供體，既避免了遠緣融合中細胞核的不親和性和融合率低、融合子不穩定的難題，又省去了誘變篩選遺傳標記的繁復工作，避免了不良突變給育種工作帶來的困憂，而且可以大大提高融合率。 3、加快了馴化過程，這種新的菌株經過進一步的選育培養，在1-2年內即可完成選育馴化，獲得大量的臺磨和銀盤蘑菇子實體，3年內達到商業化栽培的目的。 具體實施例方式 本實施例以大白樁菇(臺蘑和銀盤蘑菇主要品種之一)的馴化為例1、鳳尾菇菌株收集選擇生長快、產量高、質量好的鳳尾菇子實體收集擔孢子，UV處理孢子液，進行單孢分離，篩選出Prol.營養缺陷型突變體作為受體菌株。 2、大白樁菇菌種采集五臺山管涔山采集大白樁菇新鮮子實體，使用組織分離培養基在無菌條件下進行組織分離培養，得到雙核體純菌種作為供體菌株。 3、原生質體分離鳳尾菇菌株和大白樁菇菌株的菌絲體進行原生質體分離，分別得到106個/ml以上的純原生質體，將供體菌種的原生質體60℃，處理5分鐘，得到滅活供體。 4、原生質體融合將受體的原生質體與供體滅活原生質體融合、再生，融合劑為30％的PEG，再生培養基為OCMA和OMMA，在OMMA上選出再生菌株。 5、將再生菌株在組織分離培養基上培養，，選出具較快生長速度的供體菌株，在實驗室進行母種、原種、栽培種、栽培袋培養。所用培養基均在常規培養基的基礎上添加馴化菌種產地2％的土壤6、每年6月份，在雨季來臨之前，在五臺山和管芩山適宜大白樁菇生長的林區播種培養好的菌袋菌絲體。一般選擇林蔭地腐殖質較厚的地方挖20厘米見方的土坑，將脫去塑料袋的大白樁菇菌絲體埋入土坑，上面覆蓋1厘米左右的腐殖土即可。 7、7月底到9月底即可在播種的林地采集到大量的大白樁菇子實體。 權利要求 1.一種用融合技術馴化栽培野生名貴食用菌臺蘑和銀盤蘑菇的方法，其特征是以所馴化的野生名貴食用菌菌種的雙核體原生質體作為供體，與具有所需優良特性的易于人工栽培的食用菌菌種的單核體原生質體作為受體融合，從而選育出易于人工培養的野生名貴食用真菌新菌株，具體步驟(1)收集受體菌株收集生長快、產量高、質量好的鳳尾菇子實體收集擔孢子，進行單孢分離，UV處理孢子液，篩選營養缺陷型突變體作為受體菌株；(2)收集供體菌種采集分離臺磨或銀盤蘑菇的新鮮子實體，在無菌條件下進行組織分離得到純菌種菌絲體作為供體菌株；(3)原生質體分離將受體菌種和供體菌種分別進行菌絲體培養和原生質體分離、純化，供體菌種的雙核體原生質體經過60℃、5分鐘的高溫滅活后與帶有遺傳標記的受體單核體原生質體融合；(4)受體的原生質體與供體滅活原生質體融合后，再生，通過選擇性培養基選出融合子再生菌株；(5)將再生菌株進一步培養、分離、篩選，得到恢復活性獲得新的生理和生態特性的供體菌株，從中選擇具有優良性狀的臺磨或銀盤蘑菇新菌株進行擴大培養，在實驗室進行母種培養、原種培養、栽培種培養，最后進行菌絲體的菌袋生產。(6)將培養的菌絲體在適宜的季節播種在五臺山、管涔山適宜于臺磨或銀盤蘑菇生長的林區，當年8-10月份即可采集生長出的大量臺蘑或銀盤蘑菇子實體。 2.根據權利要求1所述的用融合技術馴化栽培野生名貴食用菌臺蘑和銀盤蘑菇的方法，其特征在于所述的受體菌種選用鳳尾菇，供體菌種為五臺山和管涔山的名貴野生食用菌臺磨或銀盤蘑菇。 3.根據權利要求1和2所述的用融合技術馴化栽培野生名貴食用菌臺蘑和銀盤蘑菇的方法，其特征在于所述的培養基由下列組份構成，組織分離培養基、母種培養基、原種培養基、栽培種培養基和大量培養菌絲體的栽培袋培養料均在常規培養基的基礎上添加2％的馴化菌種產地土壤。 全文摘要 本發明是一種用融合技術馴化栽培野生名貴食用菌臺蘑和銀盤蘑菇的方法，其特征是以所馴化菌種臺蘑和銀盤蘑菇的雙核體原生質體作為供體，與具有所需優良特性菌種鳳尾菇(Pleurotus sajor－caju auct.non Sing.)的單核體原生質作為受體融合，從而選育出易于人工培養的所馴化的野生臺蘑和銀盤蘑菇菌株。本發明選用產量高，生態條件要求粗放，易于栽培的食用菌鳳尾菇作為受體，而將馴化的臺磨和銀盤蘑菇的菌種作為供體進行原生質體的融合，使馴化的野生食用菌種的基本遺傳物質在受體菌株內得以表達，進行正常分裂、繁殖，經過幾代以后再從受體菌株內將供體的雙核體重新分離出來，從而篩選出既保持了供體的基本遺傳特性而又獲得受體的一些優良特性的新菌株。 文檔編號C12N15/02GK1442480SQ03111970 公開日2003年9月17日 申請日期2003年3月10日 優先權日2003年3月10日 發明者李程才, 梁枝榮, 張池堂, 李兆寧, 韓博 申請人:李程才 |
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